Interacción molecular experimental: experimento de bloqueo de migración de gel emsa

I. introducción técnica

La tecnología emsa, es decir, el experimento de migración en gel o movilidad electroforética, se utiliza para estudiar la interacción entre las proteínas de unión ADN / ARN y sus secuencias de unión ADN / ARN asociadas;

II. principios técnicos

La proteína purificada o el extracto grueso de la célula se incuba con una sonda de ADN o ARN marcada, y en la página de gel de Poliacrilamida no desnaturalizada, la movilidad de la proteína de ADN o complejo de proteína de ARN es más lenta que la de la sonda no unida, detectando así la transcripción o regulador de la proteína activada que Se une al ADN o arn.

III. escenarios de aplicación

1. investigación sobre la regulación de la expresión génica: determinar los sitios de unión y las características de Unión de los factores de transcripción con el adn, y estudiar el mecanismo de regulación de la expresión génica.

2. investigación sobre el mecanismo de la enfermedad: analizar la regulación anormal de la expresión de genes relacionados con la enfermedad y explorar el mecanismo de aparición y desarrollo de la enfermedad.

3. descubrimiento de dianas farmacéuticas: detección e identificación de proteínas de Unión al ADN relacionadas con enfermedades, proporcionando dianas para el desarrollo de medicamentos.

4. investigación de la vía de la señal: estudiar los cambios en la actividad de las proteínas de Unión al ADN en la vía de la señal y sus efectos en los genes aguas abajo.

IV. ventajas tecnológicas

1. la operación experimental es relativamente simple y no es exigente con las condiciones experimentales.

2. puede detectar una variedad de tamaños y estructuras moleculares de ácidos nucleicos y una amplia gama de tamaños de proteínas, y puede detectar la Unión de diferentes proteínas a diferentes moléculas de ácidos nucleicos en un solo sistema de reacción.

3. la sonda marcada con biotina es estable, segura, precisa y altamente amigable.

V. tipos de muestras

Células frescas (células adherentes / células suspendidas), células congeladas, tejidos congelados, muestras de proteínas nucleares o factores de transcripción purificados, algunos experimentos también pueden utilizar proteínas expresadas recombinantemente.

VI. necesidades de las muestras

Muestras celulares: aproximadamente 1 × 10,7 (puede ser una placa de Petri de 10 cm, o almacenada en un tubo centrífuga en forma de células suspendidas, o un vial t75);

Tejido congelado: unos 400 mg;

Tejido vegetal: aproximadamente 2g; proteína nuclear, factor de transcripción purificado, proteína de expresión recombinante, etc. proporcionar al menos 50 ul por membrana, con una concentración no inferior a 0,5 mg / ML.

VII. preparación de muestras y transporte

Muestras de células vivas: las más cercanas pueden transportar muestras de células frescas criadas en placas de Petri / botellas T75 / tubos centrífuga por mensajería a temperatura ambiente (a más tardar al día siguiente), que se pueden entregar flash o en persona en la ciudad, y las más lejanas pueden transportarse por hielo seco de células congeladas a - 80 ° c;

Muestras de tejido & otras muestras líquidas: - 80 ℃ liofilización y transporte de hielo seco.

8. reactivos que deben suministrarse

Los anticuerpos específicos de la proteína de Unión son superiores a 50 ul, y la concentración es superior a 0,5 mg / ML.

9. ciclo experimental

2 - 3 semanas

X. otros

Secuencia de sonda, si no hay secuencia de sonda, proporcione información relacionada con la proteína de Unión al ADN o literatura relacionada.