CitocinasB5()citocromo B5(...)Kit de determinación de contenido

Método de trazabilidad 100T/96S

Asegúrese de tomar antes de la determinación formal. 2 - 3 Cada muestra con grandes diferencias en las expectativas hace predicciones.Importancia de la determinación:

CitocinasP450 Las enzimas son un grupo de isoenzimas presentes principalmente en el hígado y juegan un papel importante en el metabolismo de sustancias exógenas, especialmente los medicamentos yMetabolismo del veneno. Citocinas P450 CitocinasB5 síP450 Dos proteínas heme del sistema enzimático, cuyos cambios en la relación con P450 Dai Xie HuoEl sexo está estrechamente relacionado.

Principio de determinación:

Citocinas oxidadas B5 Después de la restauración de lianerya *, en 424 nm Hay un pico máximo de absorción en el lugar, determinado por 424 nm y 490 nm Se puede calcular la diferencia en el valor de absorción de luz.salirCitocinasB5Contenido.

Kit de determinación del contenido de citocromo B5 serie P450

Composición:

Reactivo 1: polvo× 2 Botellas,4℃Guardar. Más antes del uso temporal 100 ml Agua destilada, completamente disuelta.

Preparación del líquido de trabajo:

Prepare antes de usar, use guantes desechables, abra cuidadosamente la tapa del reactivo tres y agregue el agente de prueba dos. 20 ml Disuelva completamente,4℃Se puede conservar evitando la luz 1 Zhou.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Instrumentos y suministros propios:

Centrifugadora ordinaria, centrifugadora de exceso de velocidad, pistola de desplazamiento ajustable, espectrómetro ultravioleta/.Medidor de estándar enzimático, placa de Petri de vidrio traza/ 96 Placa de agujero y vaporAgua destilada.

Citocinas en muestras B5 extraer:

1、Eliminar materiales macromoleculares como núcleos y mitocondrias:Se llama aproximadamente 0.5g Organización, adhesión 1 ml Reactivo uno, completamente molido en hielo,10 000g 4℃Salircorazón 30 minutos, retire el líquido claro y transfiera a la tubería centrífuga de exceso de velocidad.

2、Microsomas gruesos:100 000g,4℃Centrifugadora 60 minutosAbandona el líquido claro superior.

3、Eliminar impurezas como la hemoglobina:Paso hacia adelante 2 Precipitación en Canadá central 1 ml El reactivo 1, después de cubrirlo, se disuelve completamente por choque,100 000g Centrifugadora 30 minutos, abandonarShangqing.

4、Líquido a medir:Paso hacia adelante 3 El segundo agente de prueba en la precipitación 0,5 mlDespués de la tapa, se disuelve completamente por choque, es decir, el líquido a medir, que debe determinarse el mismo día.

Citocinas B5 Operación de determinación del contenido:

1. Fotómetro/.Precalentamiento del medidor de estándar enzimático 30 mínimo.

2. El líquido de trabajo se coloca en 25℃Precalentamiento en baño de agua 30 mínimo.

3. Tubo en blanco:取 1 ml Placa de Petri de vidrio, añadir 10 μl Agua destilada,200 μl Líquido de trabajo, reposo a temperatura ambiente 2 mínimo,424 nm y 490 nm Succión localValor de la luz,424 nm El valor de absorción de luz en el lugar se registra comoA Tubo en blanco 1,490 nm El valor de absorción de luz en el lugar se registra comoA Tubo en blanco 2.△A Tubo en blanco=A Tubo en blanco 1-A vacíoTubo blanco 2

4. Tubo de determinación:取 1 ml Placa de Petri de vidrio, añadir 10 μl El líquido a medir,200 μl Líquido de trabajo, reposo a temperatura ambiente 2 mínimo,424 nm y 490 nm Succión localValor de la luz,424 nm El valor de absorción de luz en el lugar se registra comoA Tubo de determinación 1,490 nm El valor de absorción de luz en el lugar se registra comoA Tubo de determinación 2.

△A Tubo de determinación=A Tubo de determinación 1-A Tubo de determinación 2.

atención: solo se necesita hacer un tubo en blanco.

Citocromo de la muestra B5 Fórmula de cálculo del contenido:

a.La fórmula de cálculo para la determinación con una placa de Petri de cuarzo traza es la siguiente:

（1）Calculado por concentración de proteínas

CitocinasB5 Contenido(nmol/mg) Prot) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷(ε×d) ×V Anti - Total△()Cpr × V Muestra(...)

=122,8 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷Cpr

（2）Calculado por la masa de la muestra

CitocinasB5 Contenido..Nmol por g Peso fresco)=..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷(ε×d) ×V Anti - Total×()V Total de muestras÷V Muestra(...)÷W

=61,4 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷W

ε: citocinas reductorasB5 Coeficiente de extinción de nanol,171 × 10^-6 L/nmol/cmV;d: diámetro de la luz de la placa de Petricm),1 cmV; V Anti - total: volumen total del sistema de reacción,210 μl = 2,1 × 10^-4 LV;CPR: concentración de proteínas en el líquido a medir..mg por ml), que debe determinarse por separado;VMuestra: añadir el volumen de líquido a medir en el sistema de reacción,10 μl = 0,01 mlV;VTotal de la muestra: volumen total del líquido a medir,0,5 mlV;W: calidad de la muestra..g).

b.usar 96 La fórmula de cálculo para la determinación de la placa de agujero es la siguiente:

（1）Calculado por concentración de proteínas

CitocinasB5 Contenido(nmol/mg) Prot) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷(ε×d) ×V Anti - Total△()Cpr × V Muestra(...)

=245,6 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷Cpr

（2）Calculado por la masa de la muestra

CitocinasB5 Contenido..Nmol por g Peso fresco)=..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷(ε×d) ×V Anti - Total×()V Total de muestras÷V Muestra(...)÷W

=122,8 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷W

ε: citocinas reductorasB5 Coeficiente de extinción de nanol,171 × 10^-6 L/nmol/cmV;d:96 Diámetro de la luz de la placa de agujerocm),0,5 cmV; V Anti - total: volumen total del sistema de reacción,210 μl = 2,1 × 10^-4 LV;CPR: concentración de proteínas en el líquido a medir..mg por ml), que debe determinarse por separado;VMuestra: añadir el volumen de líquido a medir en el sistema de reacción,10 μl = 0,01 mlV;VTotal de la muestra: volumen total del líquido a medir,0,5 mlV;W: calidad de la muestra..g).

Kit de determinación del contenido de citocromo B5 serie P450