Acetildan esterasa alcalina..AchE(...)Instrucciones del kit de determinación de actividad

Método de trazabilidad 100T/96S

Asegúrese de tomar antes de la determinación formal. 2 - 3 Cada muestra con grandes diferencias en las expectativas hace predicciones.Importancia de la determinación:

AchE Pertenece a la enzima de Hidrolasa del ácido hialurónico y está ampliamente presente en varios tejidos animales y suero.AchE Catalizar la base de acetildan..Ach(...)Hidrolizado, enLa regulación de la conducción nerviosa juega un papel importante.

Principio de determinación:

AchECatálisisAchLa hidrolisis produce una base dan, una base dan y un ácido Disulfito de P - nitrobenzoico.()DTNB(...)Generación de acción 5 -Sulfhídrico-ácido nitrobenzoico()TNB(...)V; TNBEn 412nmHay picos de absorción en el lugar, por determinación de 412 nmTasa de aumento de la absorción, cálculo AchEActividad.

Kit de determinación de la actividad de la esterasa alcalina de acetildan serie P450

Composición:

Reactivo 3: polvo× 1 Ramas,4℃Guardar. Adhesión previa al uso temporal 1.3 ml El reactivo 2 se disuelve completamente por choque.Reactivo 4: polvo× 1 Ramas,4℃Guardar. Adhesión previa al uso temporal 1.3 ml El reactivo 2 se disuelve completamente por choque.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Instrumentos y suministros propios:

Fotómetro visible/.Medidor de estándar enzimático, placa de Petri de cuarzo traza/ 96 Placa de agujero, centrífuga de baja temperatura, olla de baño de agua, pistola de desplazamiento ajustable y agua destilada.

Enzima brutaExtracción líquida:

1. Organización: según la calidad de la organización..g): un volumen de reactivo(ml)Para 1:5 a 10Proporción deSe recomienda hacer una cita. 0.1gOrganización, adhesión 1 mlReactivosI) homogeneizar el baño de hielo,8000 g 4 ℃Centrifugadora 10 minutos, tome el líquido claro para medir.

2. Bacterias, hongos: por número de células..10⁴ : un volumen de reactivoml(...)Para 500 a 1000:1 Proporción desugerencia 500 Diez mil células másEntrar 1 ml Reactivo uno),La ecografía del baño de hielo rompe las células..potencia 300w, ultrasonido 3 Segundos, intervalos 7 Segundos, tiempo total 3 minutos(...); luego 8000g, 4℃, centrífuga 10 minutosTomar el líquido superior y colocarlo sobre hielo para su prueba.

3. Suero y otros líquidos: determinación directa.

Operación de determinación:

1. Fotómetro/.Precalentamiento del medidor de estándar enzimático 30 mínimoAjustar la longitud de onda a 412 nm, el agua destilada se ajusta a cero.

2. El reactivo 2 se coloca 37℃Precalentamiento en baño de agua 30 minutos.

3. Tomar una pequeña placa de Petri de cuarzo/ 96 Placa de agujero, añadida a su vez 20 μlShangqing,160 μlReactivo dos,10 μl Reactivos III y 10 μlReactivo 4, mezcla rápidaUniforme, Yu412nm Determinación in situ3 minutos Cambio del valor de absorción interna, No.10 segundos El valor de absorción de luz se registra comoA1， 第190s El valor de absorción de luz se registra comoA2.△A Tubo de determinación= A2-A1. AchECálculo de la actividad:

a.La fórmula de cálculo para la determinación con una placa de Petri de cuarzo traza es la siguiente:

1. organizaciónAchE Actividad

（1）Calculado en función de la concentración de proteínas

Definición de la unidad activa: producción catalítica por minuto de proteína por miligramo 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol/min/mg) Prot) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹) △()CPR × V Muestra(...)÷T

= 245 ×△A÷Cpr

（2）Calculado por la masa de la muestra

Definición de la unidad activa: producción catalítica por gramo de tejido por minuto 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol/min/g) Peso fresco) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹) △()W × V Muestra÷V Total de muestras(...)÷T

=245 ×△A ÷ W

2. Bacterias, célulasAchE Actividad

Definición de la unidad activa: cada 10⁴ Producción catalítica de células individuales por minuto 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol / min / 10)⁴ celda) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹) △(número de células× V Muestra÷V Total de muestras(...)÷T

=245 ×△A ÷Número de células

3. SueroAchE Actividad

Definición de la unidad activa: producción catalítica por minuto por mililitro de suero 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol/min) /.ml) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹÷V Muestra÷T

= 245 ×△A

ε:TNBCoeficiente de extinción molecular,13,6 × 10³ L/mol/cmV;d: diámetro de la luz de la placa de petri,1 cmV;VAnti - total: volumen total del sistema de reacción..L), 200 μl = 2 × 10^-4LV;V Total de la muestra: volumen del extracto,1 mlV;10⁶:1 mol = 1 × 10⁶de μmolV;CPR: concentración de proteínasmg por ml);V Muestra: añadir el volumen del líquido sobrenadante..ml),0.02 mlV;W : calidad de la muestra;T: tiempo de reacciónmínimo),3 minutos.

b.usar 96 La fórmula de cálculo para la determinación de la placa de agujero es la siguiente:

1. organizaciónAchE Actividad

（1）Calculado en función de la concentración de proteínas

Definición de la unidad activa: producción catalítica por minuto de proteína por miligramo 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol/min/mg) Prot) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹) △()CPR × V Muestra(...)÷T

= 490 ×△A÷Cpr

（2）Calculado por la masa de la muestra

Definición de la unidad activa: producción catalítica por gramo de tejido por minuto 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol/min/g) Peso fresco) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹) △()W × V Muestra÷V Total de muestras(...)÷T

= 490 ×△A ÷ W

2. Bacterias, célulasAchE Actividad

Definición de la unidad activa: cada 10⁴ Producción catalítica de células individuales por minuto 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol / min / 10)⁴ celda) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹) △(número de células× V Muestra÷V Total de muestras(...)÷T

=490 ×△A ÷Número de células

3. SueroAchE Actividad

Definición de la unidad activa: producción catalítica por minuto por mililitro de suero 1 nmol TNB La cantidad de enzima es 1 Una unidad de actividad enzimática.

AchE Actividad enzimática(nmol/min) /.ml) =..△A ÷e÷d×V Anti - Total× 10⁹÷V Muestra÷T

= 490 ×△A

ε:TNB Coeficiente de extinción molecular,13,6 × 10³ L/mol/cmV;d:96 Diámetro de la placa de agujero,0.5 cmV;V Anti - total: volumen total del sistema de reacción..L), 200 μl = 2 × 10^-4LV;VTotal de la muestra: volumen del extracto,de 1 mlV;10⁶:1 mol = 1 × 10⁶de μmolV;CPR: concentración de proteínasmg por ml);VMuestra: añadir el volumen del líquido sobrenadante..ml),0.02 mlV;W : calidad de la muestra;T: tiempo de reacciónmínimo),3 minutos.

Kit de determinación de la actividad de la esterasa alcalina de acetildan serie P450