Carboxiesterasa..CarE(...)Instrucciones del kit de determinación de actividad

Método de trazabilidad 100T/96S

Asegúrese de tomar antes de la determinación formal. 2 - 3 Cada muestra con grandes diferencias en las expectativas hace predicciones.Importancia de la determinación:

MamíferosCarETambién conocido como esterasa alifáticaaliesterasa), ampliamente distribuido en tejidos y órganos, pertenece a la familia de las enzimas de Hidrolasa de ácido hialurónico.CarECataliza la degradación de sustancias endógenas y exógenas que contienen enlaces de éster, enlaces de amida y enlaces de éster de azufre, pero no puede catalizar la degradación de la base de acetildan y sus análogos.CarE Participa en el transporte y metabolismo de lípidos y está relacionado con la desintoxicación y metabolismo de una variedad de medicamentos, sustancias tóxicas ambientales y carcinógenos. los plaguicidas organofosforados se pueden combinar yInhibiciónCarEActividad.

Principio de determinación:

CarE Puede catalizar el ácido acético- 1 -El éster de naftaleno produce el éster de naftaleno y la canasta sólida se colorea; En 450 nm Tasa de aumento de la absorción de luz, cálculoCarE Actividad.

Kit de determinación de la actividad de la carboxiesterasa (care)

Composición:

Reactivo 3: polvo× 2 Ramas, 4℃Conservar y recoger antes de su uso temporal 1 Reactivos de rama tres, más 0,6 ml El etanol anhidro se disuelve completamente; Reactivo 4: polvo× 2Ramas,-20℃Conservar y recoger antes de su uso temporal 1 Reactivos de rama cuatro, añadir una pequeña cantidad de reactivos dos para disolver;

Preparación del líquido de trabajo: preparación previa al uso, dirección 1 En el reactivo de botella 2, agregue el reactivo disuelto 3 y el reactivo 4 cada uno. 1 Ramas, completamente disueltas, filtradas,4℃Conservar protegido de la luz, disponible 1 Zhou.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Instrumentos y suministros propios:

Espectrómetro visible, centrífuga de mesa, pipeta ajustable,1 ml Placas de Petri de vidrio, morteros, hielo y agua destilada.

Extracción de líquido enzimático bruto:

Preparación de muestras bacterianas y celulares

Recoger bacterias o células en un tubo centrífuga y descartarlas en el sobrenadante después de la centrifugación; De acuerdo con cada 200 Diez mil bacterias o células se unen 400 μl Reactivo 1, ultrasonido para romper bacterias o células..potencia 20%, ultrasonido 3s, intervalo 10 segundos, repetir 30 Veces);12000g 4 ℃Centrifugadora 30 minutos, tome el líquido claro para medir.

2, organización: de acuerdo con la calidad de la organización..g): un volumen de reactivo(ml)Para 1:5 a 10 Proporción deSe recomienda hacer una cita. 0.1g Organización, adhesión 1 ml Reactivo 1) homogeneizar el baño de hielo;12000g 4 ℃Centrifugadora 30 minutos, tome el líquido claro para medir.

3, líquido: determinación directa

Operación de determinación:

1. Fotómetro/.Precalentamiento del medidor de estándar enzimático 30 minutosAjustar la longitud de onda a 450 nm, el agua destilada se ajusta a cero.

2. El reactivo 2 se coloca 37℃Precalentamiento en baño de agua 30 mínimo.

3. Tubo en blanco:Tomar una placa de Petri de vidrio traza/ 96 Placa de agujero, añadida a su vez 5 μl Agua destilada y 200 μl El reactivo 2 se mezcla rápidamente y se mezcla bien. 450 nm Medición in situFija 3 minutosCambio del valor de absorción interna, No. 10 segundosEl valor de absorción de luz se registra comoA1， 第 190sEl valor de absorción de luz se registra comoA2.△ATubo en blanco= A2-A1

4. Tubo de determinación:Tomar una placa de Petri de vidrio traza/ 96 Placa de agujero, añadida a su vez 5 μl Shangqing y 200 μl El reactivo 2 se mezcla rápidamente y se mezcla bien. 450 nm Medición in situ

Fija 3 minutos Cambio del valor de absorción interna, No. 10 segundos El valor de absorción de luz se registra comoA3， 第 190s El valor de absorción de luz se registra comoA4.△A Tubo de determinación=A4-A3

Nota: el tubo en blanco solo necesita ser determinado una vez.

CarE Fórmula de cálculo de la actividad:

a.La fórmula de cálculo para la determinación con una placa de Petri de cuarzo traza es la siguiente:

1, en la organizaciónCarE Actividad

（1）Calculado por concentración de proteínas

CarE Definición de la unidad activa: cadamg de Proteína tisular en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como 1 Una unidad de actividad enzimática.

CarE Actividad enzimática(U/mg) Prot) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)× V Anti - Total÷(Cpr×V) Muestra÷T

=13,67 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷Cpr

（2）Calculado por el peso fresco de la muestra

CarE Definición de la unidad activa: cadag Organizado en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como 1 Una unidad de actividad enzimática.

CarE Actividad enzimática(U/g) Peso fresco) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)× V Anti - Total×()V Total de muestras÷V Muestra(...)÷W÷T

= 13,67 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷W 2, en bacterias o célulasCarEActividad

CarE Definición de la unidad activa: cada 1 Diez mil bacterias o células en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como unCarE vivir

Unidades sexuales.

CarE Actividad enzimática(U/10⁴ celda) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco) ×V Anti - Total×()V Total de muestras÷V Muestra)△Densidad celular..10⁴ célula/ml(...)

÷T=13,67×(△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco) △Densidad celular..10⁴ célula/ml(...) 3, en líquidoCarEActividad

CarE Definición de la unidad activa: cada ml de muestra está en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como 1 Una unidad de actividad enzimática.

CarE Actividad enzimática(U/ml) ) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)× V Anti - Total÷V Muestra÷T

= 13,67 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)

V Anti - total: volumen total del sistema de reacción,205μl = 2,05 × 10^-4LV;V Total de la muestra: volumen total del líquido sobrenadante,1 mlV;V Muestra: añadir el volumen del líquido sobrenadante(ml),

0.005 mlV;CPR: concentración de proteínas,mg por mlV;W: calidad de la muestra..g);T: tiempo de reacciónmínimo),3 minutos.

b.usar 96 La fórmula de cálculo para la determinación de la placa de agujero es la siguiente:

1, en la organizaciónCarE Actividad

（3）Calculado por concentración de proteínas

CarE Definición de la unidad activa: cadamg de Proteína tisular en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como 1 Una unidad de actividad enzimática.

CarE Actividad enzimática(U/mg) Prot) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)× V Anti - Total÷(Cpr×V) Muestra÷T

=13,67 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷Cpr

（4）Calculado por el peso fresco de la muestra

CarE Definición de la unidad activa: cadag Organizado en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como 1 Una unidad de actividad enzimática.

CarE Actividad enzimática(U/g) Peso fresco) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco) ×V Anti - Total×()V Total de muestras÷V Muestra(...)÷W÷T

= 13,67 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco÷W 2, en bacterias o célulasCarEActividad

CarE Definición de la unidad activa: cada 1 Diez mil bacterias o células en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como unCarE vivir

Unidades sexuales.

CarE Actividad enzimática(U/10⁴ celda) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)× V Anti - Total×()V Total de muestras÷V Muestra)△Densidad celular..10⁴ célula/ml(...)

÷T=13,67×(△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco) △Densidad celular..10⁴ célula/ml(...)

3. En líquidoCarE Actividad

CarE Definición de la unidad activa: cada ml de muestra está en 37℃Aumenta la absorción de luz catalítica por minuto en el sistema de reacción 1 Definido como 1 Una unidad de actividad enzimática.

CarE Actividad enzimática(U/ml) ) =..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)× V Anti - Total÷V Muestra÷T

= 13,67 ×..△A Tubo de determinación-△A Tubo en blanco(...)

V Anti - total: volumen total del sistema de reacción,205μl = 2,05 × 10^-4LV;V Total de la muestra: volumen total del líquido sobrenadante,1 mlV;V Muestra: añadir el volumen del líquido sobrenadante(ml),

0.005 mlV;CPR: concentración de proteínas,mg por mlV;W: calidad de la muestra..g);T: tiempo de reacciónmínimo),3 minutos.

Kit de determinación de la actividad de la carboxiesterasa (care)