Instrucciones del kit para la determinación del contenido de proteínas por método de biuretano

Método de trazabilidad 100T/96S

Nota: selección antes de la determinación formal 2 - 3 Se hacen predicciones de muestras con grandes diferencias esperadas para garantizar que la concentración de proteínas sea 1 a 10 mg/ml AlcanceDentro.

Importancia de la determinación:

El contenido de proteínas solubles de la muestra se utiliza a menudo para calcular la actividad enzimática. Además, el contenido de proteínas solubles también se utiliza en análisis de calidad como los alimentos.

Principio de determinación:

En una solución alcalina fuerte, el biuretano y CuSO4 Formar un complejo morado; La profundidad del color del complejo morado es proporcional a la concentración de proteínas, mientras queEl peso molecular de la proteína no tiene nada que ver con la composición de los aminoácidos, por lo que se puede utilizar para determinar el contenido de proteínas. El rango de determinación de este método es 1 ~ 10mg Proteínas, adecuadas para muestras con altas concentraciones de proteínas, especialmente materiales animales.

Kit de determinación del contenido de proteínas por método de biuretano - stock permanente

Composición:

Estándar: líquido 1 ml x 1 Botellas,5 mg/ml a 4°CGuardar.

Instrumentos y suministros propios:

Centrifugadora, espectrómetro visible/ medidor de estándar enzimático, placa de Petri de cuarzo traza / 96 Placa de agujero, pipeta y agua destilada.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Extracción de proteínas solubles de la muestra:

1. muestras líquidas:Las muestras de líquido incoloro claro se pueden determinar directamente.

2. muestras de tejido:De acuerdo con la calidad de la organización..G): volumen del extracto (ml)Para 1: 5 a 10 Proporción deSe recomienda hacer una cita. 0.1g Organización, adhesión 1 mlExtracción (propia, selección de tampón de extracción enzimática o agua destilada o solución salina según sea necesario)))

Homogeneizado de baño de hielo,8000 g, 4 ° CCentrifugadora 10min， Extraer el líquido superior, es decir, el líquido a medir. (las muestras de animales a menudo necesitan ser diluidas(...)

3 , bacterias, hongos: por número de células..104): volumen del extractoml)Para Proporción de 500 a 1000: 1..sugerencia 5 millones de célulasunirse 1 ml Extracto), ultrasonido de baño de hielo para romper células..potencia 300w, ultrasonido 3 Segundos, intervalos 7 Segundos, tiempo total 3 minutos);luego 8000g，

4℃, centrífuga 10 minutosTomar el líquido superior y colocarlo sobre hielo para su prueba.

Operación de determinación:

1. Fotómetro/.Precalentamiento del medidor de estándar enzimático 30 mínimoAjustar la longitud de onda a 540 nm, el agua destilada se ajusta a cero.

2. Tubo en blanco:取 0,5 ml EP Tubo, añadir 40 μl Agua destilada,200 μl Reactivo 1, mezclar bien y Dejar reposar a temperatura ambiente 15 mínimo， 取 200 μl En trazasPlaca de Petri de vidrio/ 96 Placa de agujero,540 nm Comparación de colores, anotada comoA Tubo en blanco.

3. Tubo estándar:取 0,5 ml EP Tubo, añadir 40 μl Líquido estándar,200 μl Reactivo 1, mezclar bien y Dejar reposar a temperatura ambiente 15 mínimo， 取 200 μl En una placa de Petri de vidrio trazaPlaca de agujero / 96, 540 nmComparación de colores, anotada como Tubo estándar A.

4. Tubo de determinación:取 0,5 ml EP Tubo, añadir 40 μl El líquido a medir,200 μl Reactivo 1, mezclar bien y Dejar reposar a temperatura ambiente 15 mínimo， 取 200 μl En trazasPlaca de Petri de vidrio/ 96 Placa de agujero,540 nm Comparación de colores, anotada comoA Tubo de determinación.

Nota: los tubos en blanco y los tubos estándar solo deben determinarse una vez.

Fórmula de cálculo de la concentración de proteínas en la muestra:

C Por medir..en mg/ml)=C Tubo estándar×(A) Tubo de determinación -A Tubo en blanco÷(A) Tubo estándar -A Tubo en blanco(...)

= 5×(A) Tubo de determinación -A Tubo en blanco÷(A) Tubo estándar -A Tubo en blanco(...)

Precauciones:

1. La concentración de proteínas de la muestra debe ser 1 a 10 mg/mlDentro del rango, por debajo 1 mg/mlNo se puede usar este método, por encima 10 mg / ML deben diluirse en consecuencia. Por lo tanto, la mediciónUso previo 1 a 2Cada muestra hace un experimento previo para asegurarse de que la concentración de proteínas es de Dentro del rango de 1 a 10 mg / ML.

2. La extracción de proteínas de la muestra a medir puede usarse como solución salina normal, doble vapor de agua o sin proteínas. PBS Extracción. El método está sujeto al sulfato de amonio,Tris Interferencia del amortiguador, elevaciónLa extracción de líquido no debe contener estas sustancias; De lo contrario, se cambiará.Kit de determinación del contenido de proteínas bca.

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