Fosfatasa alcalina..AKP/ALP(...)Instrucciones del kit de determinación de actividad

Método de trazabilidad 100T/48S

Asegúrese de tomar antes de la determinación formal. 2 - 3 Cada muestra con grandes diferencias en las expectativas hace predicciones.Importancia de la determinación:

AKP/ALP Es una proteasa azucarada que contiene zinc que puede hidrolizar varios compuestos de monoéster Fosfolípidos naturales y sintéticos en un ambiente alcalino.

AKP/ALP Ampliamente distribuido en todos los órganos del cuerpo humano, principalmente el hígado.

Principio de determinación:

En un ambiente alcalino,AKP/ALP Catalizar la producción de polifenoles libres a partir del fosfato de fendicarbonato de sodio; Fenoles y 4 -Amidatibilina y ferrocianuro Hua reaccionan con potasio rojoDerivados de la quinona, en 510 nmAbsorción de luz característica; A través de la determinación 510 nmTasa de aumento de la absorción para calcularAKPActividad.

Kit de determinación de la actividad de la Fosfatasa alcalina serie de esterasa

Composición:

Reactivo 4: líquido× 1 Botellas,4℃Se conserva protegido de la luz y se puede usar antes de convertirse en azul y Verde. Estándar: líquido× 1 RamaEP En el tubo,2 moles/ml Solución estándar de fenoles,4℃Guardar.

Instrumentos y suministros propios:

Fotómetro visible/.Medidor de estándar enzimático, placa de Petri de cuarzo traza/ 96 Placa de agujero, centrífuga de mesa, olla de baño de agua, pipeta ajustable y agua destilada.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Extracción de líquido enzimático bruto:

1. Organización: según la calidad de la organización..g): un volumen de reactivo(ml)Para 1:5 a 10Proporción deSe recomienda hacer una cita. 0.1gOrganización, adhesión 1 mlReactivosI) homogeneizar el baño de hielo,4℃,8000gCentrifugadora 10 minutos, tome el líquido claro para medir.

2. Bacterias o células: por número de bacterias o células..104 : un volumen de reactivoml(...)Para 500 a 1000:1 Proporción desugerencia 500 diez milIncorporación celular 1 mlReactivo 1), ultrasonido de baño de hielo para romper células..potencia 300w, ultrasonido 3 Segundos, intervalos 7 Segundos, tiempo total 3 minutos);luego 8000g,4℃, centrífuga 10 minutosTomar el líquido superior y colocarlo sobre hielo para su prueba.

3. La sangre se puede determinar directamente o después de una dilución adecuada.

Pasos de determinación:

1. Fotómetro/.Precalentamiento del medidor de estándar enzimático 30 minutosAjustar la longitud de onda a 510 nm, el agua destilada se ajusta a cero.

2. El reactivo tres se coloca 37℃Precalentamiento en baño de agua 30 mínimo.

3. Tubo en blanco:取EP Tubo, añadir 4 μl Agua destilada,40 μl Reactivo dos,40 μl Reactivo 3, mezclar bien y colocarlo 37℃Aislamiento térmico en baño de agua 15 minutosV;Añadir el reactivo 4 120 μlDespués de mezclar bien 510 nmDeterminación de la absorción, anotada comoATubo en blanco.

4. Tubo estándar:取EP Tubo, añadir 4 μl Productos estándar,40 μl Reactivo dos,40 μl Reactivo 3, mezclar bien y colocarlo 37℃Aislamiento térmico en baño de agua 15 minutosV;

Añadir el reactivo 4 120 μlDespués de mezclar bien 510 nm Determinación de la absorción, anotada comoA Tubo estándar.

5. Cuidado:取EP Tubo, añadir 4 μl Shangqing,40 μl Agua destilada,40 μl Reactivo 3, mezclar bien y colocarlo 37℃Aislamiento térmico en baño de agua 15 minutosV;Añadir el reactivo 4 120 μlDespués de mezclar bien 510 nmDeterminación de la absorción, anotada comoATubo de determinación.

6. Tubo de determinación:取EP Tubo, añadir 4 μl Shangqing,40 μl Reactivo dos,40 μl Reactivo 3, mezclar bien y colocarlo 37℃Aislamiento térmico en baño de agua 15 minutosV;

Añadir el reactivo 4 120 μlDespués de mezclar bien 510 nm Determinación de la absorción, anotada comoA Tubo de determinación.Entre ellos, el tubo estándar y el tubo en blanco solo necesitan hacer un tubo, y el tubo de determinación y el tubo de cuidado deben hacer cada muestra.

Nota: los tubos en blanco y los tubos estándar solo deben determinarse una vez.

AKP/ALP Cálculo de la actividad:

1. En la sangreAKP/ALP Cálculo de la vitalidad

Definición de la unidad activa:37℃Producción catalítica por minuto por mililitro de sangre en el Medio 1 μmol El fenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.

AKP/ALP 活力(μmol/min) por ml)= [C] Productos estándar×(A) Tubo de determinación-A Cuidado÷(A) Tubo estándar-A Tubo en blanco×V Anti - Total] △V Muestra

÷T=6.8×(A) Tubo de determinación-A Cuidado÷(A) Tubo estándar-A Tubo en blanco(...)

2. En tejidos, bacterias o célulasAKP/ALP Cálculo de la actividad

（1）Calculado en función de la concentración de proteínas

Definición de la unidad activa:37℃Producción catalítica por minuto de proteína por miligramo Medio 1 μmolarEl fenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática. AKP/ALP (μmol/min/mg) prot)=[C] Productos estándar×(A) Tubo de determinación-A Cuidado÷(A) Tubo estándar-A Tubo en blanco×V Anti - Total]÷(Cpr×V)Muestra÷T = 6,8× (A)Tubo de determinación-ACuidado÷(A)Tubo estándar-ATubo en blanco÷Cpr

（2）Calculado por la masa de la muestra

Definición de la unidad activa:37℃Producción catalítica por minuto de tejido por gramo Medio 1 μ molar El fenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.

AKP / ALP (μmol / min / g) Peso fresco)=[C Productos estándar×(A) Tubo de determinación-A Cuidado÷(A) Tubo estándar-A Tubo en blanco×V Anti - Total]÷(W×V Muestra÷VTotal de muestras÷T = 6,8× (A)Tubo de determinación-ACuidado÷(A)Tubo estándar-ATubo en blanco÷W

（3）Calculado por el número de bacterias o células

Definición de la unidad activa:37℃Cada uno de ellos 10⁴ Una bacteria o célula que cataliza la producción cada minuto 1 μmolarEl fenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.AKP/ALP (μmol/min/10)⁴ celda))[C] Productos estándar×(A) Tubo de determinación-A Cuidado÷(A) Tubo estándar-A Tubo en blanco×V Anti - Total] △Número de células× V Muestra÷V Total de muestras÷T= 6,8×(A)Tubo de determinación-ACuidado÷(A)Tubo estándar-ATubo en blanco) △Número de células

C Productos estándar:2 μmol / mlV;V Anti - total: volumen total del sistema de reacción..ml),205μl = 0,205mlV; CPR: concentración de proteínas en el líquido enzimático bruto()mgpor ml(...)，Se necesita una determinación adicional, se recomienda utilizar la producción de la empresa. BCAKit de determinación del contenido de proteínas;W : calidad de la muestra;VMuestra: añadir el volumen de líquido sobrenadante al sistema de reacción..ml),0.004mlV;VTotal de la muestra: volumen del extracto,de 1 mlV;T: tiempo de reacciónmínimo),15 minutos.

Precauciones:

1. El reactivo 2, el reactivo 3 y el reactivo 4 deben conservarse protegidos de la luz.

2. El reactivo cuatro no se puede usar después de cambiar de azul a Verde.

3. Se debe mezclar inmediatamente después de agregar el reactivo 4, de lo contrario el color no quieretodo.

Kit de determinación de la actividad de la Fosfatasa alcalina serie de esterasa