Fosfatasa ácida..ACP(...)Instrucciones del kit de determinación de actividad

Método de trazabilidad 100T/48S

Asegúrese de tomar antes de la determinación formal. 2 - 3 Cada muestra con grandes diferencias en las expectativas hace predicciones.Importancia de la determinación:

ACP La monoéster de fosfato se hidroliza catalíticamente en condiciones ácidas llamadas ácido fosfórico inorgánico, que es común en las enzimas solubles de los macrófagos.ACP Comúnmente utilizado en el diagnóstico auxiliar del cáncer de próstata.

Principio de determinación:

En un ambiente ácido,ACP Producción catalítica de P - nitrobenceno fosfato disódico por pirólisis 4 -NitrobenFenoles, ende 405 nm Absorción de luz característica; A través de la mediciónFijade 405 nmTasa de aumento de la absorción para calcularACPActividad.

Serie de esterasas del kit de determinación de la actividad de la Fosfatasa ácida (acp)

Composición:

Instrumentos y suministros propios:

Medidor de etiqueta enzimática,96 Placa de agujero, centrífuga de mesa, olla de baño de agua, pipeta ajustable y agua destilada.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Extracción de líquido enzimático bruto:

1. Organización: según la calidad de la organización..g): un volumen de reactivo(ml)Para 1:5 a 10 Proporción deSe recomienda hacer una cita. 0.1g Organización, adhesión 1 ml ReactivosI) homogeneizar el baño de hielo,4℃,10000gCentrifugadora 10 minutos, tome el líquido claro para medir.

2. Bacterias o células: por número de bacterias o células..10⁴ : un volumen de reactivoml(...)Para 500 a 1000:1 Proporción desugerencia 500 diez milIncorporación celular 1 ml Reactivo 1), ultrasonido de baño de hielo para romper células..potencia 300w, ultrasonido 3 Segundos, intervalos 7 Segundos, tiempo total 3 mínimo);luego 10000g,4℃, centrífuga 10 minutosTomar el líquido superior y colocarlo sobre hielo para su prueba.

3. La sangre se puede determinar directamente o después de una dilución adecuada.

Determinación:

1. Precalentamiento del medidor de estándar enzimático 30 mínimoAjustar la longitud de onda a 405 nm.

2. En EP Añadir los siguientes reactivos al tubo

Mezclar bien, absorber 200µL unirse 96 En el tablero de agujeros,405 nm Determinar el valor de absorción de luz de cada tubo a continuación.ΔA = A Tubo de determinación-A Cuidado.

Nota: cada tubo de medición debe ser atendido por un par.

ACP Cálculo de la actividad:

Curva estándar y =7.3336x - sí.0.0179V;R² =0.9996V;x Es la concentración estándar..moles/ml),y Es el valor de absorción de luzΔA.

1. En la sangreACP Cálculo de la actividad

Definición de la unidad activa:30℃Producción catalítica por minuto por mililitro de sangre en el Medio 1 μmol 4 -El nitrobenfenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.

ACP 活力(μmol/min/ml) =()ΔA-0,0179(...)÷ 73336 × V Anti - Total÷T÷V Muestra

= 0.4545 ×()ΔA-0.0179(...)

2. En tejidos, bacterias o células ACP Cálculo de la actividad

（1）Calculado en función de la concentración de proteínas

Definición de la unidad activa:30℃Producción catalítica por minuto de proteína por miligramo Medio 1 de μmol 4 -El nitrobenfenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.

ACP 活力(μmol/min/mg) Prot) =..ΔA-0,0179)÷7,3336 ×V Anti - Total÷T÷(V) Muestra×Cpr)

= 04545 ×()ΔA-0,0179(...)÷Cpr

（2）Calculado por la masa de la muestra

Definición de la unidad activa:30℃Producción catalítica por minuto de tejido por gramo Medio 1 μ molar 4 -El nitrobenfenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.

ACP 活力 (μmol/min/g) Peso fresco)=(ΔA-0,0179)÷7,3336 × V Anti - Total÷T÷(W×V) Muestra÷V Total de muestras(...)

= 0.4545 ×()ΔA-0.0179(...)÷W

（3）Calculado por el número de bacterias o células

Definición de la unidad activa:30℃Cada uno de ellos 10⁴ Una bacteria o célula que cataliza la producción cada minuto 1 μ molar 4 -El nitrobenfenol se define como 1 Una unidad de actividad enzimática.

ACP 活力(μmol/min/10)⁴ celda)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 × V Anti - Total÷T÷(número de células× V Muestra÷V Total de muestras(...)

=0.4545 ×()ΔA-0,0179(...)△Número de células

VAnti - total: volumen total del sistema de reacción..ml),1 mlV; W : calidad de la muestra,gV; V Muestra: volumen de muestra en el sistema de reacción de adición()ml(...),

0,01 mlV;V Total de la muestra: volumen del extracto,1 mlV;T: tiempo de reacciónmínimo),30 mínimoV;500: número total de células o bacterias,500 Diez mil.

Precauciones:

ACP Inestabilidad, especialmente en 37℃yEl pH Mayor que 7 La pérdida de vitalidad es rápida en las condiciones, por lo que las muestras de Fosfatasa ácida generalmente deben prepararse el mismo día;En la muestra de suero, se añade por mililitro de suero 10 mgCitrato de hidrógeno disódico o 5 mgSulfato de hidrógeno de sodioEl pHBajar 6.5 Por debajo, o 5 mlsangreQing se une 30%Solución de ácido acético 2-.3 Gotear, colocar 4℃Se puede guardar 1 Zhou.

Serie de esterasas del kit de determinación de la actividad de la Fosfatasa ácida (acp)