Kit de detección de luminosidad

Kit de detección fotométrica la proteasa metálica similar a la integrina marcada por fitc para varios productos de venta caliente de la compañía y el anticuerpo beta - actuando / beta - Acción marcado por fitc de anticuerpos tipo 1 - 12 (anticuerpo de referencia interna) el anticuerpo beta 2 / beta 2 - ar del Receptor adrenérgico marcado por fitc, el anticuerpo beta 1 del Receptor adrenérgico marcado por fitc, el anticuerpo allgrove asociado al síndrome

　Introducción del kit de prueba de luminosidad:

El PDC se encuentra principalmente en levadura y es una de las enzimas clave en la fermentación del etanol, que cataliza la Descarboxilación del piruvato para producir acetaldehído.

Principio de determinación:

El PDC cataliza la Descarboxilación del piruvato para producir acetaldehído, y añade etanol deshidrogenasa (adh) para catalizar aún más la reducción del Acetaldehído por Nadh para producir etanol y nad +; NADH tiene un pico de absorción a 340 nm, mientras que nad + no; La actividad del PDC se calcula determinando la tasa de disminución de la absorción de luz a 340 nm.

Instrumentos y suministros propios:

Morteros, hielo, centrifugadora de mesa, espectrómetro ultravioleta, placa de Petri de cuarzo de 1 ml, pistola de desplazamiento ajustable y agua al vapor doble.

Composición y preparación del agente:

Extracto: 100 ml × 1 botella de líquido, conservado a 4 ° c.

Reactivo 1: líquido 20ml × 1 botella, conservado a 4 ° c.

Reactivo 2: polvo × 1 botella, conservar a 4 ℃ de la luz. Añadir 1 ml de agua destilada para disolver antes del uso temporal; Después de empaquetar los reactivos interminables, se conservan a - 20 ℃, y está prohibido congelar y descongelar repetidamente.

Reactivo 3: polvo × 1 botella, conservar a 4 ℃ de la luz. Añadir 1 ml de agua destilada para disolver antes del uso temporal; Después de empaquetar los reactivos interminables, se conservan a - 20 ℃, y está prohibido congelar y descongelar repetidamente.

Reactivo 4: polvo × 1 botella, conservar a 4 ℃ de la luz. Añadir 1 ml de agua destilada para disolver antes del uso temporal; Después de empaquetar los reactivos interminables, se conservan a - 20 ℃, y está prohibido congelar y descongelar repetidamente.

Tabla de Operaciones de determinación:

Fórmula de cálculo de la actividad enzimática:

La fórmula de cálculo para la determinación con una placa de Petri de cuarzo traza es la siguiente:

(1) calculado por la concentración de proteínas de la muestra:

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por miligramo de proteína tisular es una unidad de actividad enzimática (u).

Actividad Dao (nmol / MIN / mg proto) = × V anti total ÷ (v muestra × cpr) ÷ t = 18 × a460 ÷ CPR

(2) calculado por la masa de la muestra:

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por gramo de tejido se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad Dao (nmol / MIN / g de peso fresco) = × V anti total ÷ (v muestra ÷ V muestra total × w) ÷ t = 18 × a460 ÷ W

(3) por número de células:

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y a una temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por 104 células se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad Dao (nmol / MIN / 104cell) = × V anti - total ÷ (v - tipo ÷ V - tipo total × número de células) ÷ t = 18 × a460 ÷ número de células

(4) en volumen líquido

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y a una temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por mililitro de suero se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad Dao (nmol / MIN / ml) = × V anti total ÷ V muestra ÷ t = 18 × a460

Epsilon: coeficiente de extinción de milimoles de o - anisidina oxidada: 7,5 L / mmol / cm; D: diámetro de la placa de petri, 1 cm; V total: volumen total de la reacción, 0,2 ml; v: volumen de la muestra en la reacción, 0,05 ml; V total: volumen del extracto añadido, 1 ml; cpr: concentración de proteínas de la muestra, mg/mL； W: masa de la muestra, g; t: tiempo de reacción, 30 min

La fórmula de cálculo determinada con una placa de 96 agujeros es la siguiente:

(1) calculado por la concentración de proteínas de la muestra:

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por miligramo de proteína tisular es una unidad de actividad enzimática (u).

Actividad Dao (nmol / MIN / mg proto) = × V anti total ÷ (v muestra × cpr) ÷ t = 36 × a460 ÷ CPR

(2) calculado por la masa de la muestra:

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por gramo de tejido se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad Dao (nmol / MIN / g de peso fresco) = × V anti total ÷ (v muestra ÷ V muestra total × w) ÷ t = 36 × a460 ÷ W

(3) por número de células:

Definición de actividad enzimática: a pH 7.2 y a una temperatura de 37 ° c, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la producción de 1nmol H2O2 por minuto por 104 células se define como una unidad de actividad enzimática.

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