Línea de células endoteliales de la vena umbilical humana

Inmortalización de las células endoteliales de la vena umbilical humana huvec

Identificación de células l

Se ha aprobado la identificación de inmunofluorescencia

L fuente celular

Banco Nacional de recursos (academia China de Ciencias de shanghai)

L Fondo celular

La línea de células endoteliales de la vena umbilical humana huvec fue construida por atcc en los Estados Unidos hace mucho tiempo y luego se utilizó ampliamente, pero en los últimos años se ha encontrado contaminación cruzada en la fuente celular, que ha sido retirada de los estantes internacionales, y los Estados Unidos también han encontrado problemas celulares, por lo que se ha construido una nueva línea huve - c, pero en la actualidad, las semillas de esta célula están en mal estado y no se pueden usar después de su introducción en el país. Por lo tanto, es difícil encontrar células huve - C de células endoteliales de la vena umbilical humana en buenas condiciones en el mercado. Debido a que no hay células adecuadas en buenas y precisas condiciones al mismo tiempo, hemos hecho una línea de inmortalización celular primaria nacional para obtener una nueva célula precisa: células inmortalizadas de células endoteliales de la vena umbilical humana. Proporcionar identificación de inmunofluorescencia de marcador de células endoteliales individuales. Las células se llaman: células inmortalizadas de células endoteliales de la vena umbilical humana, el mismo tipo de células que huve - c, son células endoteliales de la vena umbilical humana, pero se llaman diferentes, y debido a que se construyen líneas nacionales, no se puede proporcionar la identificación str, sino la identificación de inmunofluorescencia.

L características celulares

1) fuente: tejido del cordón umbilical humano

2) morfología: crecimiento de la pared similar a las células endoteliales

3) contenido: > 1x106 número de células

4) especificaciones: embalaje de t25 botellas o 1 ml de tubo de almacenamiento congelado

5) uso: solo para investigación científica.

L condiciones de cultivo:

1) preparación de un sistema de cultivo de células endoteliales (recomendación: primed - awcell - 002)

Medio básico de cultivo de células endoteliales 93%

Suero bovino fetal (fbs) 5%

Aditivos para el cultivo de células endoteliales 1%

Penicilina / estreptomicina, P/S 1%

2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 ° c, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

L precauciones:

La línea de células endoteliales de la vena umbilical humana huvec puede referirse a los siguientes métodos para la transmisión de células adherentes:

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 0,25% (w / v) Tripsina - 0,53 mm EDTA al frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), digerir en una incubadora a 37 ° C durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si una gran parte de La célula se redondea y se cae, recuperarla rápidamente a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con 10 ° s después de golpear ligeramente el frasco de cultivo para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 minutos en condiciones de 1000rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir un nuevo medio de cultivo * configurado de 6 - 8 ml de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

L forma de transporte:

Baja temperatura: (1) transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ml, después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros de inmediato.

Las células sobrevivientes de la recuperación de t25 botellas a temperatura ambiente (2) se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

L bioseguridad

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.