Células miocárdicas de rata h9c2

Células miocárdicas de rata h9c2

Identificación de células l

Se ha aprobado la identificación de especies y géneros

L fuente celular

Banco Nacional de recursos

L Fondo celular

B. kimes y B. Brandt subclonaron la línea celular h9c2 (2 - 1) a partir de una línea celular clonada derivada del tejido cardíaco embrionario de la rata bd1x, que muestra muchas características del músculo esquelético. Los miocitos de esta línea celular pueden fusionarse para formar tubos musculares multinucleares y responder a la estimulación de la acetilcolina. Si la concentración sérica en el medio cae al 1%, la fusión ocurre rápidamente.

L características celulares

1) fuente: corazón

2) morfología: miocitos, crecimiento pegado a la pared

3) contenido: > 1x106 número de células

4) especificaciones: embalaje de t25 botellas o 1 ml de tubo de almacenamiento congelado

5) uso: solo para investigación científica.

L condiciones de cultivo:

1) preparar el medio de cultivo dmem (incluido 1,5g / L NaHCO3 recomendado: awcell - 128 - 0001) o (gibco, número de artículo 12800017, añadir NaHCO3 1,5g / l); Suero bovino fetal de alta calidad, 10%; Doble resistencia 1%.

2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

L precauciones:

Nota: el miocito cardíaco de rata h9c2, una célula que crece bien en el medio dmem (que contiene 1,5g / lnahcho3), contiene una mayor concentración de NaHCO3 (3,7g / l) en la mayoría de las marcas, y si se utiliza el medio dmem (3,7g / L nahco3) para cultivar células, es necesario aumentar la concentración de CO2 (7% - 10%).

Para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos:

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 0,25% (w / v) Tripsina - 0,53 mm EDTA al frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), digerir en una incubadora a 37 ° C durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si una gran parte de La célula se redondea y se cae, recuperarla rápidamente a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con 10 ° s después de golpear ligeramente el frasco de cultivo para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir un nuevo medio de cultivo * configurado de 6 - 8 ml de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

L forma de transporte:

Baja temperatura: (1) transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ml, después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros de inmediato.

Las células sobrevivientes de la recuperación de t25 botellas a temperatura ambiente (2) se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

L bioseguridad:

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.