Células renales embrionarias humanas 293t

Hek - 293t células renales embrionarias humanas

Oye, 293t '293t'.

Identificación de células l

Se ha aprobado la identificación Str

L fuente celular

Banco Nacional de recursos

L Fondo celular

Las células hek - 293t son un derivado de la línea celular 293t (293tsa1609neo) (atcc CRL - 11268). Las células continúan expresando el antígeno sv40, que se utiliza comúnmente en experimentos de transfección y es más eficiente. (la transfección generalmente se pavimenta con una densidad del 50%, y después de que la célula acaba de pegarse a la pared del plato (generalmente 8 - 10 horas), se puede realizar la operación de transfección)

L características celulares

1) fuente: riñón embrionario humano

2) morfología: similar a las células epiteliales, crecimiento pegado a la pared, capacidad de pegado débil

3) contenido: > 1x106 número de células

4) especificaciones: embalaje de t25 botellas o 1 ml de tubo de almacenamiento congelado

5) uso: solo para investigación científica

L condiciones de cultivo:

1) preparar el medio de cultivo dmem (recomendado awcell - 0001); Suero bovino fetal de alta calidad, 10%; L - Glutamina (2mm) 1%; NEAA 1% ； Doble resistencia 1%

2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 ° c, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

L precauciones:

La célula es una célula suspendida y ligeramente adherida a la pared, y la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

1. recogida: recoger las células suspendidas del frasco de cultivo en un tubo centrífuga. Lavar las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio. Debido a que las células no se adhieren firmemente a la pared, las células se caerán después de humedecer el pbs, por lo que el PBS también debe reciclarse en el tubo centrífuga.

2. añadir 0,25% (w / v) Tripsina - 0,53 mm EDTA a un matraz de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml) para digerir durante 1 - 2 minutos en una incubadora a 37 ° c (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayor Parte de la célula se redondea y se cae rápidamente, llevarlo de vuelta a la Mesa de operaciones, añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con 10 ° s después de golpear ligeramente el matraz de cultivo para terminar la digestión.

3. centrifugar las células en suspensión recogidas, las células en el limpiador de PBS y las células adherentes digeridas durante 5 minutos a 1000 rpml, descartar el sobrenadante, complementar el medio de cultivo de 1 - 2 ML y volver a suspender y mezclar bien, dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de nuevo * medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y continuar la transmisión en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

Criopreservación de células T 293 de células renales embrionarias humanas: después de recibir las células, se recomienda congelar un lote de semillas celulares en las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

L forma de transporte:

Baja temperatura: (1) transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ml, después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros de inmediato.

Las células sobrevivientes de la recuperación de t25 botellas a temperatura ambiente (2) se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

L bioseguridad:

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.