Células de leucemia monocítica humana thp - 1

Células de leucemia monocítica humana thp - 1

THP1; O-THP-1; Pediatría del Hospital de Tohoku-1

Identificación de células l

Se ha aprobado la identificación Str

L fuente celular

Banco Nacional de recursos

L Fondo celular

Se estableció a partir de la sangre periférica de un niño de 1 año con leucemia monocítica aguda (lma) que recayó en 1978. Esta célula puede devorar las gotas de leche y los glóbulos rojos activados, sin inmunoglobulinas superficiales y celulares. La diferenciación de monocitos se puede inducir con fobosol tpa.

Nota: la mutación de las nras se indica erróneamente como p.gly12ser en PubMed = 9379676.

L características celulares

1) fuente: leucemia aguda de monocitos, monocitos

2) morfología: monocitos, suspensión

3) contenido: > 1x106 número de células

4) especificaciones: embalaje de t25 botellas o 1 ml de tubo de almacenamiento congelado

5) uso: solo para investigación científica

L condiciones de cultivo

1) preparar el medio de cultivo rpmi - 1640 (awcell - 0002 recomendado); Suero bovino fetal de alta calidad, 10%; Etanol a base de 0,05 mm beta - Qiu (recomendación de nivel de cultivo celular: awcell - 8211); Doble resistencia, 1%.

2) proporción de transmisión de referencia: la densidad celular se controla en 2 - 4 × 105cell / ML durante la transmisión, y la transmisión se realiza cuando la célula crece a 8 - 10 × 105cell / ML.

3) frecuencia de cambio de líquido de referencia: cambio de líquido al pasar.

4) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

5) congelador: * medio de cultivo 95%, Dmso 5% (después de usar este congelador, la tasa de supervivencia de la reanimación de acuerdo con la experiencia de mi banco es de aproximadamente 50%, y después de la reanimación se necesita un cultivo adicional de 7 - 10 días para reanudar el crecimiento)

L precauciones

[precauciones):

La célula es una célula suspendida. según la experiencia de cultivo y los comentarios de los clientes, el uso de [método de cambio de medio líquido] durante la transmisión es más beneficioso para el Estado celular, por lo que nuestra biblioteca recomienda que utilice [método de cambio de medio líquido] para la transmisión.

1. después de recibir las células que proporcionamos enviadas en un tubo centrífuga de 15 ml, no recoja las células por centrifugación. primero puede preparar dos nuevos frascos de cultivo t25, luego mezclar las células uniformemente y trasladarlas a dos nuevos frascos de cultivo t25 para complementar el medio de cultivo a 10 ML. Póngalo en una incubadora a 37 ° c.

2. las células que recibe son enviadas en botellas de cultivo t25. Primero recoja las células por centrifugación, luego vuelva a colgar las células y agregue 12 ml de * medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones. sople uniformemente y luego mueva a dos nuevas botellas de cultivo t25 para cultivarlas.

3. células suspendidas thp - 1. La célula prefiere un tratamiento suave cuando se cultiva, y el tratamiento centrífuga de la célula se minimiza cuando se cultiva para causar daño a la célula. No cambie todo el medio de cultivo al cambiar el líquido. se recomienda usar el [método de cambio medio] para pasar, añadir el medio de cultivo celular para diluir la célula hasta mantener la densidad.

4. las células son más sensibles a la calidad del suero, y mi biblioteca recomienda que use suero de alta calidad de marca importada para el cultivo. El FBS no debe inactivarse, si la célula crece lentamente intente usar otros FBS o aumentar temporalmente la concentración de FBS al 20%

5. es necesario agregar etanol a base de beta - Qiu (nivel de cultivo celular) al medio de cultivo de la célula, si no se agrega, puede afectar el Estado celular.

El etanol a base de beta - Qiu tiene una estabilidad limitada y no se puede agregar el etanol a base de beta - Qiu al medio de cultivo para su almacenamiento a mediano y largo plazo, y luego se puede agregar el etanol a base de beta - mercaptol cada paso o adición líquida.

El etanol a base de beta - Qiu (etanol a base de 2 - qiu) se añade a los linfocitos u otros cultivos celulares, ya que el aminoácido Cisteína es escaso en el FBS utilizado en los medios, mientras que la Cistina es abundante. Algunas células, como las células t, no pueden transportar la Cisteína al Citosol y deben convertirla en cisteína. El etanol beta - Qiu reduce la Cistina a una forma que puede ser transportada por las células y luego se convierte en la Cisteína necesaria para el crecimiento celular. El etanol a base de beta - Qiu también es un agente reductor que puede descomponer muchos de los metabolitos tóxicos producidos por las células en el cultivo, mejorando así el entorno circundante de las células.

6. la célula es más sensible a la densidad celular, preste atención a mantener la densidad celular en el rango adecuado al cultivar y transmitir (consulte las instrucciones celulares para más detalles).

7. la tasa de recuperación de la célula después de la Criopreservación es baja, por favor, aumente la cantidad de células según corresponda durante la criopreservación.

8. por lo general, el crecimiento celular se puede mantener añadiendo un medio de cultivo * a la célula en crecimiento, y cada 7 días se puede centrifugar la célula y volver a colgarla en un medio recién emparejado para completar el intercambio completo de la célula.

Instrucciones del atcc sobre el mantenimiento de la vitalidad celular en las células thp - 1

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(los recuentos celulares frecuentes son la mejor manera de monitorear el thp - 1. Estas células deben cultivarse cada dos o tres días simplemente agregando una pequeña cantidad de medio fresco al matraz (dándoles un medio condicional). No necesitas centrifugar las células cada vez y volver a transmitirlas. Cuando se cultiva en nuestro laboratorio, a la segunda jornada, las células suelen poder expandirse a frascos más grandes con más medios. Cuando la densidad celular alcanza 8 × 105 células vivas / ml, es necesario pasar de generación en generación. No se permite que la densidad celular supere 1 × 10 (6) células vivas / ml)

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 0,25% (w / v) Tripsina - 0,53 mm EDTA al frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), digerir en una incubadora a 37 ° C durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si una gran parte de La célula se redondea y se cae, recuperarla rápidamente a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con 10 ° s después de golpear ligeramente el frasco de cultivo para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 minutos en condiciones de 1000rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir un nuevo medio de cultivo * configurado de 6 - 8 ml de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

4) el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo * recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Se recomienda que el vial de cultivo t25 pase de 1: 2 por primera vez después de recibir la célula.

L forma de transporte

Baja temperatura: (1) transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ml, después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros de inmediato.

Temperatura ambiente: (2) las células sobrevivientes de la recuperación de t25 se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

L bioseguridad

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.