Detección de proliferación celular y toxicidad de Zeta Life - Kit cck

Detección de proliferación celular y toxicidad de Zeta Life - Kit cck

Precio: yen615 - 2800

marcaVida ZETA.

Número de artículo:K009

Origen:Estados Unidos

proveedor:ShanghaiLeitongBiotechnology co., Ltd.

cantidad: 1000

Nombre en inglés:cck8

Fecha de caducidad24 meses

Condiciones de conservación: conservación a 4 ° C de la luz

especificación:500T-3000T

Detección de proliferación celular y toxicidad de Zeta Life - Kit cck

Cellcounting kit, conocido como cck kits, es un kit de detección rápida y de alta sensibilidad basado en wst (sal de tetrazol soluble en agua, nombre químico: 2 (2 - metoxi - 4 - nitrobenceno) - 3 (4 - nitrobenceno) - 5 (2,4 - disulfonilbenceno) - Sal monosódica de 2H tetrazol) para la proliferación celular y la citotoxicidad.

Cck es un producto alternativo actualizado de mtt, que tiene ventajas obvias sobre MTT u otros productos similares de MTT como xtt. mts:

El formazan reducido por la deshidrogenasa en las mitocondrias - cck es soluble en agua y no requiere una disolución específica para disolverse, mientras que el formazan producido por wst y xtt, mts no es soluble en agua, por lo que se pueden ahorrar pasos de disolución posteriores.

- cck es más estable que xtt y mts, lo que hace que los resultados experimentales sean más estables.

Cck tiene un rango lineal más amplio y una mayor sensibilidad que mtt, xtt, etc.

Comparación entre el método cck y otros métodos de detección:

Instrucciones de operación:

I. hacer curvas estándar (al determinar el número específico de células)

1. primero se cuenta el número de células en la suspensión celular preparada con una placa de recuento celular, y luego se inoculan las células.

2. diluir proporcionalmente (por ejemplo: 1 / 2 proporción) a su vez con un medio de cultivo y una proporción igual a un gradiente de concentración celular, generalmente se deben hacer 3 - 5 gradientes de concentración celular, 3 - 6 agujeros compuestos en cada grupo.

3. después de la vacunación, se cultiva durante 2 - 4 horas para que las células se adhieran a la pared, y luego se cultiva con reactivos cck - se determina el valor de od después de un tiempo determinado, y se produce una línea con el número de células como Coordenadas horizontales (eje x).

El valor od es la curva estándar de la coordenada vertical (eje y). De acuerdo con esta curva estándar, se puede determinar el número de células de muestras desconocidas (la premisa para probar esta curva estándar es que las condiciones del experimento deben ser una

Para facilitar la determinación del número de células vacunadas y el tiempo de cultivo después de la adición de cck).

II. detección de la actividad celular

1. inocular suspensión celular (100 ul) en una placa de 96 agujeros. Precultivar la placa de cultivo en una incubadora (a 379c, 5% co2).

2. añadir una solución cck de 110ul a cada agujero (tenga cuidado de no generar burbujas de aire en el agujero, pueden afectar la lectura del valor de od).

3. incubar la placa de cultivo en la Caja de cultivo durante 14 horas.

4. determinar la absorción a 450 nm con un medidor de estándar enzimático.

5. si el valor de od no se determina temporalmente y se planea medirlo más tarde, se puede agregar una solución de HCl de 10 ul 0,1 m o una solución de SDS de WIV al 1% a cada agujero y cubrir el cultivo.

La placa se conserva a temperatura ambiente a prueba de luz. La absorción no cambiará en 24 horas.

3. valor añadido celular - detección de toxicidad

1. configurar 100u de suspensión celular en una placa de 96 agujeros. La placa de cultivo se precalienta en una incubadora durante 24 horas (a 379c, 5% co2).

2. añadir 10 ul de sustancias a medir en diferentes concentraciones a la placa de cultivo.

3. incubar la placa de cultivo en la incubadora durante un tiempo adecuado (por ejemplo: 6, 12, 24 o 48 horas).

4. se quiere agregar una solución cck de 10 ul por agujero (tenga cuidado de no generar burbujas de aire en el agujero, afectarán la lectura del valor de od).

5. incubar la placa de cultivo en la Caja de cultivo durante 1 - 4 horas.

6. determinar la absorción a 450 nm con un medidor de estándar enzimático.

7. si el valor de od no se determina temporalmente y se planea medirlo más tarde, se puede agregar una solución de HCl de 10ul 0,1 m o una solución de SDS de WIV al 1% a cada agujero, y cubrir la placa de cultivo para evitar la luz y conservarla a temperatura ambiente. La absorción no cambiará en 24 horas.

Nota: si la sustancia a medir es oxidativa o reductora, se puede reemplazar el medio fresco antes de agregar cck (eliminar el Medio y lavar la célula con el medio dos veces antes de agregar el nuevo medio) para eliminar el efecto del medicamento. Por supuesto, cuando el impacto del medicamento es relativamente pequeño, se puede deducir directamente la absorción en blanco después de agregar el medicamento en el medio de cultivo sin cambiar el medio de cultivo.

Listo para:

①Se recomienda hacer varios agujeros para explorar el número de células vacunadas y el tiempo de cultivo después de agregar el reactivo cck.

②Cuando las condiciones lo permitan, se recomienda un pipeta multicanal, que puede reducir las diferencias en la reducción de agujeros paralelos. unirse

Al agregar reactivos cck, se recomienda pegar oblicuamente a la pared de la placa de cultivo, no insertarlos debajo de la página del medio de cultivo, es fácil producir burbujas de aire, lo que interferirá con la lectura del valor de do.

③Los glóbulos blancos pueden necesitar ser cultivados durante mucho tiempo.

④Cuando se utiliza una placa estándar de 96 agujeros, la inoculación pequeña de células adheridas a la pared es de al menos 1, 000 / agujero L (medio de cultivo 100u). La sensibilidad al detectar glóbulos blancos es relativamente baja, por lo que

La cantidad de vacunación recomendada no es inferior a 2500 agujeros / F (medio de cultivo de 100 ul). Si se quiere experimentar con una placa de 24 o 6 agujeros, primero se calcula la cantidad de vacunación correspondiente a cada agujero y se añade la solución cck al 10% del volumen total del medio de cultivo por agujero.

⑤Si no hay un filtro de 450 nm, se puede utilizar un filtro con una absorción entre 430 - 490 nm, pero la sensibilidad de detección del filtro de 450 nm es mayor..

⑤La absorción del rojo fenol en el medio de cultivo se puede eliminar al calcular deduciendo la absorción del Fondo en el agujero en blanco, por lo que no afectará a la detección.

Cálculo dinámico:

Vitalidad celular * (%) = [a (más) - a (en blanco) / [a (0 más) - a (en blanco))

A (dosis): absorción de poros con solución celular, cck y farmacéutica

A (en blanco): absorción de poros con medios de cultivo y soluciones cck sin células

A (0 dosis): absorción de poros con células, soluciones cck sin soluciones farmacéuticas

* vitalidad celular: vitalidad proliferativa celular o vitalidad citotóxica

Condiciones de conservación:

49c se conserva protegido de la luz y tiene una validez de un año.

Consejos de sonido cálido: no se puede usar para el tratamiento clínico.