Células receptoras dh5a

Células receptoras dh5a

Nombre del producto: dh5a Chemical competent Cell

Código del producto: g6016

Condiciones de conservación: - 80 ° C

¿Número de artículo, cantidad, especificaciones: g6016 - 20 (20 unidades 100u1), g6016 - 100 (100 unidades 100u1) | número de artículo?

pUC19 (vector de control) 10 pg/ μ1; 10μ 1

Genotipo

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA-arg F) U169 endAl recAl

hsdR17 (rk-, mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

Instrucciones de operación

1. CLBioCélulas receptoras dh5aDeje que el hielo se derrita (o deje ir el corazón o la temperatura ambiente por un momento, inserte rápidamente en el hielo cuando el hongo esté mezclado con agua helada), agregue el ADN objetivo (plasmídeo o producto de conexión) y golpee con la manoMezcle suavemente el Fondo del tubo EP y deje reposar sobre hielo durante 25 minutos.

El baño de agua a 2,42 ° C se calienta durante 45 segundos, se vuelve rápidamente al hielo y se deja reposar durante 2 minutos, y el temblor reducirá la eficiencia de conversión.

3. añadir 700 μ1 medio estéril sin antibióticos (2yt o lb) al tubo centrífuga y mezclar a 37 ° c, 200 rpm y reanimar durante 60 minutos.

Centrifugar 4500rpm para recoger las bacterias durante un minuto, dejar alrededor de 100 μ1 de suero superior y soplar suavemente el bloque de bacterias de suspensión pesada y aplicarlo al medio de cultivo 2yt o LB que contiene los antibióticos correspondientes.

5. coloque la tableta boca abajo en una incubadora de 37 ° C para cultivar durante la noche. Si se realiza la operación de selección de manchas azules y blancas, se cultiva la placa a 37 ° C durante al menos 17h.

Precauciones

1. células receptoras clbiosugerenciaSe derrite sobre el Hielo. Se puede derretir colocando sobre el hielo durante unos 5 minutos, y se agrega el plasmídeo dentro de los 8 minutos posteriores al derretimiento, de lo contrario afectará la eficiencia de transformación.

2. al mezclar el Plásmido o el producto de conexión, se debe operar suavemente.

3. la transformación de plásmidos de alta concentración o productos de conexión de alta eficiencia puede reducir la cantidad de bacterias que finalmente se utilizan para recubrir la placa en consecuencia.