Mezcla universal SYBR verde qPCR

Condiciones de almacenamiento y transporte

Conservación a largo plazo se debe conservar a - 20 ° C para evitar la luz. después de la fusión, Mix se puede almacenar de manera estable a 4 ° C para evitar la congelación y el deshielo repetidos durante un mes.

Componentes del producto

Mezcla universal SYBR verde qPCR

Introducción del producto

Mezcla universal SYBR verde qPCREs sypr ® El reactivo qpcr especial para el método de tinte quimérico Green i, que es una premezcla de 2 × y contiene todos los componentes qpcr, excepto los primeros y las muestras de adn, puede reducir los pasos de operación, acortar el tiempo de adición de muestras y reducir la probabilidad de contaminación. Su componente central es la polimerasa de ADN Taq de arranque en caliente modificada por anticuerpos, que se combina con un sistema de Buffer cuidadosamente optimizado y un factor de promoción de la reacción pcr, lo que hace que el producto tenga las características de una fuerte especificidad y alta eficiencia de amplificación, inhibe eficazmente la amplificación no específica, puede determinar con precisión la plantilla de un amplio rango de concentración y obtener resultados qpcr estables y confiables. La premezcla contiene tintes de corrección universales, compatibles con la gran mayoría de los equipos qpcr, incluidos los instrumentos que requieren corrección de rox, y generalmente no se necesitan tintes de corrección adicionales durante el experimento.

Modo de empleo

1. precauciones de uso

① debido a la mezcla previa de tintes en mix, su proceso de conservación o preparación del sistema de reacción debe evitar la exposición a la luz fuerte;

② mezclar suavemente Mix boca abajo y boca arriba antes de usarlo, no agitar y mezclar bien, para evitar demasiadas burbujas;

③ Mix contiene tintes de corrección universal, adecuados para todos los modelos, sin necesidad de agregar tintes adicionales.

2. sistema de respuesta qpcr recomendado

A. la concentración final recomendada del primer es de 0,2 micras, que se puede ajustar en el rango de 0,1 a 1 micras cuando el efecto de reacción no es bueno;

B. se recomienda que la cantidad de muestra añadida a la plantilla sea de 1 a 2 μl. si el tipo de plantilla es el líquido original de cDNA no diluido, la cantidad añadida a la plantilla no debe exceder el 10% del sistema de reacción total. Los diferentes tipos de plantillas de ADN contienen diferentes números de copias del gen objetivo y, si es necesario, se puede diluir el gradiente para determinar la cantidad óptima de adición de plantillas de adn.

3. procedimiento de reacción qpcr (se puede ajustar adecuadamente de acuerdo con el modelo)Mezcla universal SYBR verde qPCR

Método de dos pasos

Método de tres pasos

Establecer la temperatura de recocido y extensión (recocido) de acuerdo con el valor Tm del primer; Si el fragmento amplificado está dentro de 200 bp, el tiempo de recocido y extensión (extensión) se puede establecer en 15 segundos; Además, la configuración del tiempo de recocido y extensión (extensión) debe ajustarse por sí misma de acuerdo con el tiempo mínimo de adquisición de datos necesario para el instrumento qpcr que utiliza;

B. los programas de adquisición de la curva de fusión de diferentes instrumentos qpcr son diferentes, y generalmente se puede utilizar el programa de adquisición de la curva de fusión predeterminado del instrumento.

4. optimización experimental

Si el rendimiento de la reacción no es bueno utilizando las condiciones de reacción predeterminadas, es necesario optimizar las condiciones de reacción, que se pueden realizar desde dos aspectos: la concentración del primer y el procedimiento de amplificación:

① ajuste de la concentración de primer

Cuando la concentración final del primer cambia entre 0,1 y 1,0 μm, cuanto menor sea la concentración del primer, mayor será la especificidad de la amplificación, pero la eficiencia de la amplificación disminuirá.

② optimización del programa de amplificación

Es necesario aumentar la especificidad de la amplificación, se puede utilizar un programa de dos pasos o aumentar la temperatura de recocido; Es necesario mejorar la eficiencia de la amplificación, utilizando un programa de tres pasos o alargando el tiempo de extensión.

5. principios de diseño de los primeros

① se recomienda controlar la longitud del producto amplificado en 80 a 200 bp;

② la longitud del primer es de 18 a 25 bp;

③ es mejor que la diferencia entre los valores de Tm de los primeros positivos y los primeros inversos no supere 1 ° c, y es mejor controlar los valores de Tm en 58 a 62 ° c;

④ el contenido de GC de los primeros se controla entre el 40% y el 60%;

⑤ la distribución general de los primeros a, g, C y T debe ser lo más uniforme posible, evitando la estructura continua de T / C O A / g (especialmente el extremo 3 ');

La última base en el extremo 3 'del primer es mejor g o c;

Evitar secuencias complementarias dentro de los primeros o entre los dos primeros;

Recuperación con la función ncbi blast para confirmar la especificidad del primer.

Fundada en 2004, la compañía estadounidense azaood es una empresa que desarrolla y produce kits de purificación de alta calidad de enzimas, proteínas, ácidos nucleicos y aislamiento celular, suero fetal bovino para aplicaciones de investigación, diagnóstico y biotecnología en Ciencias de la vida.LingdaoPersona; Azood es el principal fabricante certificado por ISO9001 y puede cumplir con desde la investigación hasta el procesamiento biológico por lotes a gran escala y las aplicaciones y requisitos oem.