Kit de teñido Trap

2 - 8 ° C para evitar la luz

1. el período de validez es el período de validez que se conserva en las condiciones requeridas antes de que el kit no se desbloquee.
¡2. ¡ por favor, use el reactivo lo antes posible después de desbloquearlo!

3 meses (nota: el líquido de incubación en el interior se distribuye de una sola vez, ¡ efectivo en una semana! "

microscopio

1. secciones de parafina
2. secciones congeladas
3. frotis celular, tabletas de escalada
4. frotis de sangre, etc.

1 Microscopio óptico
2. tanque de teñido
3. Pipeta
4. cronómetro
5. caja de hielo

Agua pura

1. portaobjetos
2. succión
3. guantes desechables

1. el líquido de incubación Trap es fácil de fallar, este método debe usar manchas de sangre perforadas en la piel, y debe teñirse a tiempo después de secarse;
2. al teñir las secciones congeladas, se debe reducir el tiempo de exposición de las secciones A temperatura ambiente.
3. las muestras deben ser frescas y deben tratarse inmediatamente después de tomar los materiales, de lo contrario afectarán la actividad de la enzima.
4. la fijación de tejidos debe llevarse a cabo en un refrigerador a 4 ° c, y el tiempo no debe exceder las 24 horas, de lo contrario la actividad enzimática se debilitará o desaparecerá.
5. en general, no se recomienda el uso de secciones de parafina. Si se necesita una Sección de parafina, la temperatura del tejido no debe ser superior a 56 grados Celsius cuando se incrusta parafina. Se debe utilizar parafina con un punto de fusión de 52 a 54 grados Celsius para remojar la cera, el tiempo de remojo de la cera debe ser corto, de lo contrario la actividad enzimática se debilitará o desaparecerá.
6. las secciones de parafina no necesitan ser fijas.

(nota: ¡ el líquido de incubación en el interior se distribuye de una sola vez y es válido en una semana! "
Nota: otros líquidos de trabajo deben prepararse frescos antes de su uso, y deben usarse inmediatamente después de la preparación. después de usarlos una vez, no deben colocarse.

Tratamiento de teñido de la muestra:
I. frotis de sangre y médula ósea
1. empuje la película:
Tome toda la sangre o la médula ósea 3ul a la izquierda y a la derecha sobre la placa de vidrio, mantenga la placa de vidrio empujada en un ángulo de 30 ° con la placa de vidrio, coloque la placa de vidrio empujada frente a la placa de vidrio empujada, mueva ligeramente hacia atrás para entrar en contacto con la gota de sangre, La gota de sangre se disperse a lo largo del borde inferior de la placa de empuje, y luego deslice suavemente hacia adelante a lo largo del plano de la placa de vidrio empujada a una velocidad uniforme hasta que la gota de sangre termine No sea demasiado delgado para que las células sean demasiado pequeñas y no demasiado gruesas para no superponerse demasiado.
2. fijación:
Deje que el frotis se seque naturalmente en el aire, luego Póngalo en el líquido de fijación a en este kit para fijarlo durante 2 - 3 minutos y lavarlo durante 30 - 60 segundos.
3. incubación:
Después de lavarse con agua, Póngalo en el caldo de incubación del sustrato para evitar la luz durante 60 minutos. El efecto de teñido empeorará después de secarse demasiado.
4. volver a teñir:
Después de la incubación, retire y lave el agua durante 1 minuto y vuelva a teñir antes de que las rodajas de vidrio estén secas. Se puede volver a teñir con sumulina durante 1 - 2 minutos, o con verde metilado durante 2 - 3 minutos, cualquiera de los dos se puede elegir.

2. frotis celular y arrastre celular
1. fijación:
Coloque el frotis celular o el arrastre celular en la solución de fijación a en este Kit durante 2 - 3 minutos y enjuague con agua durante 30 - 60 segundos.
2. incubación:
Después de lavarse con agua, Póngalo en el caldo de incubación del sustrato para evitar la luz durante 60 minutos. El efecto de teñido empeorará después de secarse demasiado.
3. volver a teñir:
Después de la incubación, retire y lave el agua durante 1 minuto y vuelva a teñir antes de que las rodajas de vidrio estén secas. Se puede volver a teñir con sumulina durante 1 - 2 minutos, o con verde metilado durante 2 - 3 minutos, cualquiera de los dos se puede elegir.

III. secciones congeladas
1. recuperación de la temperatura:
Coloque las rebanadas congeladas conservadas en el refrigerador a - 20 ° C en el estante de rebanadas y vuelva a calentar durante 5 - 10 minutos. Se puede volver a calentar en una incubadora de 37 ° c o colocar el estante de rebanadas en una pequeña caja y colocar la Caja en una olla de baño de agua de 37 ° C para volver a calentar.
2. hidratación:
Remoje las rebanadas tibia en agua durante 1 - 2 minutos.
3. fijación:
Deje que las rebanadas se sequen naturalmente en el aire, luego Póngalo en el líquido de fijación en este kit para fijarlo durante 2 - 3 minutos y lavarlo durante 30 - 60 segundos.
4. incubación:
Después de lavarse con agua, Póngalo en el caldo de incubación del sustrato para evitar la luz durante 60 minutos. El efecto de teñido empeorará después de secarse demasiado.
5. volver a teñir:
Después de la incubación, retire y lave el agua durante 1 minuto y vuelva a teñir antes de que las rodajas de vidrio estén secas. Se puede volver a teñir con sumulina durante 1 - 2 minutos, o con verde metilado durante 2 - 3 minutos, cualquiera de los dos se puede elegir.

IV. secciones de parafina
1. desparafinado:
Desparafinado en xileno durante 5 - 10 minutos. Vuelva a usar xileno fresco para desparafinar durante 5 - 10 minutos.
2. remojo:
Remoje en etanol anhidro durante 5 minutos. Use 90% y 70% de etanol durante otros 2 minutos, respectivamente.
3. hidratación:
Remoje en agua destilada durante 2 minutos.
4. incubación:
Incubar durante 60 minutos evitando la luz en el líquido de incubación del sustrato antes de secarse. El efecto de teñido empeorará después de secarse demasiado.
5. volver a teñir:
Después de la incubación, retire y lave el agua durante 1 minuto y vuelva a teñir antes de que las rodajas de vidrio estén secas. Se puede volver a teñir con sumulina durante 1 - 2 minutos, o con verde metilado durante 2 - 3 minutos, cualquiera de los dos se puede elegir.

Análisis de los resultados:
La respuesta positiva fue de partículas de color rojo brillante o rojo oscuro, localizadas en el citosol.

¿1 la inducción celular no tuvo éxito?
La calidad de las citocinas es importante cuando las líneas celulares o las células BMM primarias inducen osteoclastos. Cuando el efecto de inducción no es bueno, se puede considerar ajustar las condiciones de inducción, aumentar la concentración de rankl o tratar de agregar M - csf.

¿2. ¿ cómo juzgar las células positivas?
En general, no se indica a través de cambios morfológicos que las células RAW son muy morfológicas y muy diversas, y los cambios morfológicos no explican el problema. En general, se cree que el núcleo múltiple más el Trap positivo pueden decirse que son osteoclastos multinucleares.

1. Guiping Chen et al.
El bergapteno suprime la osteoclastogénesis inducida por RANKL y la osteoporosis inducida por ovariectomía mediante la supresión de las vías de señalización NF-κB y JNK.
Comunicaciones de Investigación Bioquímica y Biofísica 2019

2.Wen-Yong Fei et al.
Magnolol previene la pérdida ósea inducida por la ovariectomía mediante la supresión de la osteoclastogénesis a través de la inhibición del factor nuclear-κB y las vías de proteína quinasa activadas por mitógeno
Revista Internacional de Medicina Molecular 2019