Precauciones para el uso de kits de detección de pH celular (fluorescencia azul) 1. los reactivos en el tubo de microreactivos de la tapa espiral deben centrifugarse brevemente antes de abrir la tapa, recogiendo el líquido en la pared interior de la tapa hasta el Fondo del tubo y evitando que el líquido caiga al abrir la tapa. Antes de usarlo, retire el producto y vuelva a calentarlo a temperatura ambiente, y centrifugarlo brevemente para que la solución Dmso se concentre en el Fondo del tubo. 2. la sonda de pH es una solución dmso, que se solidifica a temperatura ambiente cuando la temperatura es baja en invierno, y es muy fácil de adherirse a la pared del tubo y la pared de la cabeza de succión. Preste atención a la necesidad de calentar y disolver, y la cabeza de succión también debe colocarse en la incubadora para calentarse, si no, es fácil solidificarse nuevamente en la pared interior de la cabeza de succión para producir pérdidas.
Introducción del kit de detección de pH celular
Temperatura de conservación: 2 - 8 ° C para evitar la luz
Precauciones
1. el kit de detección de pH celular (fluorescencia azul) no se puede conservar a - 20 ℃ durante mucho tiempo. Evite la congelación y el deshielo repetidos.
2. la sonda a es una solución dmso, que se solidifica cuando la temperatura es baja en invierno, y es muy fácil de adherirse a la pared del tubo y la pared de la cabeza de succión. Preste atención a la necesidad de calentar y derretir, centrifugar hasta el Fondo del tubo después de convertirse en un estado líquido antes de abrir la tapa.
Validez: 6 meses
Método de detección: citometro de flujo / / confocalización láser / microscopio fluorescente
Muestras aplicables: células
Aplicación del producto: medidor de flujo / / confocal láser / microscopio fluorescente
Preparación del instrumento
1. microscopía de flujo o confocalización láser o fluorescencia
2. centrifugadora
3. Pipeta
4. refrigerador
5. caja de hielo
Preparación del reactivo
1. amortiguador PBS 2. hbss 3. (alternativo) nigericin sodium salt (producto relacionado bb - 94002)
Preparación de consumibles
1. tubo centrífuga
2. succión
3. guantes desechables
Precauciones para el uso de kits de detección de pH celular lisosómico (fluorescencia azul)
1. los reactivos del tubo de microreactivos de la tapa espiral deben centrifugarse brevemente antes de abrir la tapa, recoger el líquido en la pared interior de la tapa en el Fondo del tubo y evitar que el líquido caiga al abrir la tapa. Antes de usarlo, retire el producto y vuelva a calentarlo a temperatura ambiente, y centrifugarlo brevemente para que la solución Dmso se concentre en el Fondo del tubo.
2. la sonda de pH es una solución dmso, que se solidifica a temperatura ambiente cuando la temperatura es baja en invierno, y es muy fácil de adherirse a la pared del tubo y la pared de la cabeza de succión. Preste atención a la necesidad de calentar y disolver, y la cabeza de succión también debe colocarse en la incubadora para calentarse, si no, es fácil solidificarse nuevamente en la pared interior de la cabeza de succión para producir pérdidas.
El kit de detección de pH celular detecta el pH dentro de la célula utilizando un indicador de pH o una sonda de inducción de Ph. Por lo general, hay las siguientes maneras:
Método de sonda fluorescente:
Algunos kits de pH celular utilizan sondas de inducción de pH marcadas por fluorescencia que pueden unirse a iones de hidrógeno (h) en la célula. La intensidad de fluorescencia de la sonda cambia en función del Ph. Al medir los cambios en la fluorescencia, se puede calcular el pH dentro de la célula.
Por ejemplo, las sondas fluorescentes de uso común son snarf - 1 y bcecf, que cambian la intensidad de la fluorescencia y la longitud de onda de emisión en diferentes entornos de ph, y se analizan utilizando equipos como microscopía confocal láser o espectrómetro de fluorescencia.
Método indicador de ph:
Otro método común es el uso de indicadores de pH que cambian de color a diferentes Ph. Este método se utiliza generalmente para la Observación bajo un microscopio o en combinación con un citometro de flujo. Por ejemplo, indicadores de pH como el rojo fenol pueden presentar diferentes colores a medida que el pH cambia en el medio de cultivo celular.
Método de citología de flujo (facs):
La medición del pH de una sola célula se realiza mediante medición en flujo combinada con una sonda fluorescente. Este método permite la detección de pH de alto rendimiento en poblaciones celulares.
Método de potenciómetro:
La Ley del potencial utiliza un electrodo de pH o un electrodo selectivo de iones (ise) para medir directamente los cambios potenciales dentro de la célula, calculando así el Ph.
Preguntas frecuentes:
¿Q1: ¿ qué principios se utilizan habitualmente en la detección del pH celular?
A1: se utilizan principalmente sondas fluorescentes sensibles al Ph. Estas sondas cambian su intensidad de fluorescencia o longitud de onda de emisión a diferentes valores de ph, reflejando así con precisión el pH dentro del organelo celular (como lisosoma) o el citosol.
¿Q2: ¿ por qué es necesario detectar el pH de las células?
A2: el pH celular es un parámetro fisiológico clave que afecta a una variedad de actividades vitales, como la actividad enzimática, la proliferación celular, la Endocitosis y la apoptosis celular. Las anomalías del pH están estrechamente relacionadas con procesos patológicos como tumores y enfermedades neurodegenerativas.
¿Q3: ¿ cuáles son las aplicaciones comunes de los kits de detección de pH celular?
A3: ampliamente utilizado en el estudio de la Autofagia celular (monitoreo de la acidificación de la autofagia), el metabolismo de las células tumorales (efecto waberg), los cambios de pH durante la Endocitosis mediada por receptores y los efectos de los medicamentos en el entorno celular.
¿Q4: ¿ cuáles son las precauciones clave al detectar el pH de las células?
A4: los puntos clave incluyen: garantizar la precisión de la curva de calibración, evitar el endurecimiento de la sonda, mantener la estabilidad del entorno de cultivo durante la prueba (como la concentración de co2) y establecer un grupo de control positivo y negativo razonable para garantizar la fiabilidad de los resultados.
¿Q5: ¿ cómo elegir una sonda adecuada para la detección del pH celular?
A5: es necesario seleccionar una sonda específica en función del organelo objetivo (por ejemplo, citosol, lisosoma) y seleccionar una sonda adecuada para la longitud de onda de excitación / emisión en función de la configuración láser y filtro del equipo experimental (por ejemplo, microscopio fluorescente, citometro de flujo).