T0P10感受态细胞*

Células receptoras t0p10
Nombre del producto: * 0 Chemical competent Cell
Número de producto: g6015 - 20 (20 unidades 100ul), g6015 - 100 (100 unidades 100ul)
Especificaciones / perfiles: g6015 - 20 (20 unidades 100ul), g6015 - 100 (100 unidades 100ul)

genTipo

F-mcrA△(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ△M15△lacX74 recAl ara△139△(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

Breve descripción:

La CEPA t0p10 proviene de la CEPA mc1061 y es una de las células receptoras utilizadas actualmente en el laboratorio. el genotipo es muy similar al de dh10b (dh10b es el tipo gale15, mientras que t0p10 es el tipo galu). Clbio * 0 crece más rápido (más rápido que dh5a, pero más lento que mach1 - t1), 10 horas de clonación visible, y las mutaciones de reca1 y enda1 favorecen la inserción de ADN estable y la extracción de ADN plasmídico de alta pureza. Se puede utilizar para construir clones, cribado de manchas azules y blancas y otros experimentos, con resistencia a la cadena. Las células receptoras t0p10 de la serie clbio fueron producidas por un proceso especial, y la eficiencia de conversión fue superior a 108 UFC / μg después de la detección del Plásmido puc19.

Instrucciones de operación:

1. las células receptoras clbio * 0 se dejan derretir en el hielo (o se dejan ir o a temperatura ambiente por un momento, se introducen rápidamente en el hielo cuando el hongo está mezclado con agua helada), se agrega el ADN objetivo (plasmídeo o producto de conexión) y se mezcla suavemente con el Fondo del tubo EP a mano, y se deja reposar sobre el hielo durante 25 minutos.

El baño de agua a 2,42 ° C se calienta durante 45 segundos, se vuelve rápidamente al hielo y se deja reposar durante 2 minutos, y el temblor reducirá la eficiencia de conversión.

3. añadir 700 μ1 medios estériles 2yt o LB sin antibióticos al tubo centrífuga, mezclar a 37 ° C y reanimar a 200 RPM durante 60 minutos.

Centrifugar 4500rpm para recoger las bacterias durante un minuto, dejar alrededor de 100 μ1 de suero superior y soplar suavemente el bloque de bacterias de suspensión pesada y aplicarlo al medio de cultivo 2yt o LB que contiene los antibióticos correspondientes.

5. coloque la tableta boca abajo en una incubadora de 37 ° C para cultivar durante la noche. Si se realiza la operación de selección de manchas azules y blancas, se cultiva la placa a 37 ° C durante al menos 13 H.

Precauciones:

1. las células receptoras clbio se derriten sobre el Hielo. Se puede derretir colocando sobre el hielo durante unos 5 minutos, y se agrega el plasmídeo dentro de los 8 minutos posteriores al derretimiento, de lo contrario afectará la eficiencia de transformación.

2. al mezclar el Plásmido o el producto de conexión, se debe operar suavemente.

3. la transformación de plásmidos de alta concentración o productos de conexión de alta eficiencia puede reducir la cantidad de bacterias que finalmente se utilizan para recubrir la placa en consecuencia.

Células receptoras t0p10