Método de trazabilidad del kit de detección del contenido de ácido fitico

Instrucciones del kit de detección de contenido de ácido fitico

Método de trazabilidad

Número de artículo:BC5845

Especificaciones:100T/48S

Composición del producto: antes de usarlo, verifique cuidadosamente si el volumen del reactivo es consistente con el volumen de la botella. si tiene alguna pregunta, Póngase en contacto con el personal de solebao a tiempo.

Preparación de la solución:

1. reactivo 2: añadir 4ml de reactivo 1 antes del uso temporal y disolverlo completamente; Reactivos interminables - 20 ℃ empacados y conservados4Zhou, evitar la congelación y el deshielo repetidos;

2. reactivo 3: añadir 2,36 ml de agua destilada antes de su uso para disolverla completamente, y luego extender la cabeza de la pistola debajo de la superficie del líquido y añadir lentamente.0,64 mlácido sulfúrico concentrado, bien mezclado; Se puede conservar a 2 - 8 ° C4Zhou;

3. reactivo 4: añadir 15 ml de agua destilada para disolverla completamente antes de su uso temporal, y luego extender la cabeza de la pistola debajo de la superficie del líquido y añadir lentamente.15 μLácido sulfúrico concentrado, bien mezclado; Se puede conservar a 2 - 8 ° C4Zhou;

4. líquido de trabajo: según el tamaño de la muestra antes del uso temporal, de acuerdo con el reactivo 3: reactivo 4 = 1 ml: 5 ML (un total de6 ml,40T)La proporción se mezcla bien y se agota el mismo día después de la configuración;

5. estándar: una vez que se disuelva completamente el reactivo de 1,08 ML antes de su uso, se prepara un estándar de ácido fitico de 10 μmol / ML y se conserva a 2 - 8 ℃ durante 4 semanas;

6. preparación de productos estándar de 250 nmol / ml: antes de su uso temporal, tome 50 μl de 10 μmol / ml de productos estándar de ácido fitico y 450 μl de agua destilada para mezclar en 1 μmol / ml de productos estándar (es decir, 1000 nmol / ml); Tome otro estándar de 250 μl 1000nmol / ML y7La mezcla de agua destilada de 50 μl se prepara en un estándar de ácido fitico de 250 nmol / ml, que se utiliza para la determinación del tubo estándar de la siguiente tabla de operaciones, y ahora se utiliza en la actualidad.

Descripción del producto:

El ácido fitico (ácido fitico), también conocido como ácido fosfórico de Inositol y ácido fosfórico de ciclohexol, es común en las células eucariotas y desempeña un papel clave en muchas actividades celulares, como el mantenimiento de la homeostasis del fósforo inorgánico, la participación en la señalización de las hormonas vegetales y la participación como factor auxiliar de las enzimas.ADNRestauración,ARNEdición yARNmSalida. El ácido fitico proporciona la principal fuente de fósforo durante la germinación y el crecimiento de las plantas, y se encuentra ampliamente en alimentos vegetales como cereales, legumbres, frutas, verduras y frutas secas.

Bajo ciertas condiciones ambientales, la fitasa puede descomponer el fitato de sodio (inositol hexafosfato de sodio dodecilo) para producir derivados inorgánicos de fósforo e inositol. en condiciones ácidas, el fósforo inorgánico y el desarrollador de molibdato de amonio reaccionan para producir una sustancia azul de molibdeno, que tiene un pico de absorción característico a 700 nm. al determinar el contenido de fósforo inorgánico, se puede calcular el contenido de fitato.

Nota: antes del experimento, se recomienda seleccionar 2 - 3 muestras con grandes diferencias esperadas para el experimento previo.

Instrumentos y suministros propios:

Espectrómetro visible / medidor estándar enzimático, centrífuga de baja temperatura, olla de baño de agua/.Incubadora termostática, balanza analítica, placa de Petri de microvidrio/ 96Placa de agujero, pistola de transferencia de líquido ajustable, mortero/.Homogeneizador,ácido sulfúrico concentrado（> 98%,AR(...), hielo y agua destilada.

Pasos de operación:

I,Procesamiento de muestras(el tamaño de la muestra a medir se puede ajustar adecuadamente, y la proporción específica se puede consultar en la literatura)

1. muestras de plantas frescas: por masa (g): extracto en un volumen(ml)Para1:5 a 10Proporción (se recomienda llamar cita)0.1g, unirse1 mlExtracción 1) añadir extracción 1, después de homogeneizar completamente, sacudir a temperatura ambiente2 horasY luego4℃,10000gCentrifugadora10 minutos， 取0,8 mlShangqing, añadir lentamente0,15 mlExtracción dos, soplar y mezclar lentamente hasta que no se produzcan burbujas de aire,4 ℃ 10000 gCentrifugadora10 minutosDespués de eso, se extrae la limpieza para la prueba.

2. muestras de plantas en polvo seco: por masa (g): un volumen de extracto(ml)Para1:5 a 20Proporción (se recomienda llamar cita)0.05g, unirse1 mlExtracción 1) añadir extracción 1, después de homogeneizar completamente, sacudir a temperatura ambiente2 horasY luego4℃,10000gCentrifugadora10 minutos， 取0,8 mlShangqing, añadir lentamente0,15 mlExtracción dos, soplar y mezclar lentamente hasta que no se produzcan burbujas de aire,4 ℃ 10000 gCentrifugadora10 minutosDespués de eso, se extrae la limpieza para la prueba.

3. muestra de líquido: tome 100 μl de líquido y agregue1 mlExtracto uno, choque a temperatura ambiente2 horasY luego4℃,10000gCentrifugadora10 minutos， 取0,8 mlShangqing, añadir lentamente0,15 mlExtracción dos, soplar y mezclar lentamente hasta que no se produzcan burbujas de aire,4 ℃ 10000 gCentrifugadora10 minutosDespués de eso, se extrae la limpieza para la prueba.

Nota:Extracto dosEs necesario agregar lentamente, después de agregar, se producirán muchas burbujas, se recomienda usar2El tubo ML EP se opera.

II. pasos de determinación

1. precalentamiento del espectrómetro visible / estándar enzimático30 minutosPor encima, ajuste la longitud de onda a700 nmSe puede ver que el agua destilada del fotómetro se ajusta a cero.

2. tabla de operaciones: (se añaden los siguientes reactivos al tubo 1.5 mlep)

3. cálculo del contenido de ácido fitico

1. calculado por la concentración de proteínas de la muestra

Contenido de ácido fitico..nmol/mg prot)=ΔDeterminación a×CObjetivo△ΔEstándar a× VMuestra÷(V)Muestra×Cpr) = 250×ΔDeterminación a△ΔEstándar a÷Cpr

2. calculado por la masa de la muestra

Contenido de ácido fitico..nMasa MOL / g)=ΔDeterminación a×CObjetivo△ΔEstándar a×(V)Shangqing+ VExtracto dos÷ (W × V)Shangqing÷VExtracto uno(...)

= 296875 ×ΔDeterminación a△ΔEstándar a÷W

3. en volumen líquido

Contenido de ácido fitico..nmolar/ml)=ΔDeterminación a×CObjetivo△ΔEstándar a×(V)Shangqing+ VExtracto dos÷[V]líquido× VShangqing÷(V)Extracto uno+ Vlíquido))

= 3.265.625 ×ΔDeterminación a△ΔEstándar a

Estándar c: concentración del tubo estándar, 250nmol/mL； Muestra v: añadir el volumen de la muestra,0,12 ml; v shangqing: volumen de shangqing en el momento de la extracción,0,8 mlV;VExtracto dos: añadir el volumen del extracto dos,0,15 mlV;VExtracción 1: extracción añadida 1 volumen,1 ml; cpr: concentración de proteínas de la muestra,mg/ml; v líquido: volumen de muestra líquida,0,1 ml; w: calidad de la muestra,g.

Precauciones:

1. si↑La determinación a es inferior a0.010O el valor de absorción de luz del tubo de medición está cerca del tubo en blanco, que se puede aumentar el tamaño de la muestra antes de la determinación; Si↑La determinación de a es mayor que1Se recomienda diluir adecuadamente la muestra con agua destilada antes de medirla. Preste atención a modificar simultáneamente la fórmula de cálculo.

2. si la muestra se vuelve turbia después de agregar el líquido de trabajo, se recomienda diluir adecuadamente la muestra con agua destilada antes de medirla. Preste atención a modificar simultáneamente la fórmula de cálculo.

3. el extracto 1 contiene un precipitante de proteínas, por lo que el líquido superior no se puede utilizar para la determinación de la concentración de proteínas. Para determinar el contenido de proteínas, es necesario tomar otra muestra.

Ejemplos experimentales:

1. pesar 01044 G de muestras de cebolla, seguir los pasos de extracción y determinación, y usar96Medición y cálculo de la placa del agujero:ΔDeterminación a= ADeterminación-AComparación= 0411 - 0375 = 0036,ΔEstándar a= Aestándar-Avacío= 0811 - 0096 = 0715, calculado por la masa de la muestra:

Contenido de ácido fitico..nMasa MOL / g)= 296875 ×ΔDeterminación a△ΔEstándar a÷W=143,18nMasa MOL / G.

2. pesar 0,05g de harina de trigo, seguir los pasos de extracción y determinación, y usar96Medición y cálculo de la placa del agujero:ΔDeterminación a= ADeterminación-AComparación= 0331 - 0188 = 0143,ΔEstándar a= Aestándar-Avacío= 0811 - 0096 = 0715, calculado por la masa de la muestra:

Contenido de ácido fitico..nMasa MOL / g)= 296875 ×ΔDeterminación a△ΔEstándar a÷W=1187,5nMasa MOL / G.

Referencias:

[1] Senna R, Simonin V, Silva-Neto M A C, et al. Inducción de la actividad de la fosfatasa ácida durante la germinación de semillas de maíz (Zea mays). [J]. Fisiología de plantas y bioquímica, 2006, 44(7-9):467-473.

[2] Iqbal T H, Lewis K O, Cooper B T. Actividad de la fitasa en el intestino delgado humano y de rata [J]. Gut, 1994, 35(9):1233-1236.

[3] Azeke M A, Egielewa S J, Ihimire E. Efecto de la germinación sobre la actividad de fitasa, el contenido de fitato y fósforo total del arroz (Oryza sativa), maíz (Zea mays), mijo (Panicum miliaceum), sorgo (Sorghum bicolor) y trigo (Triticum aestivum) [J]. Revista de Ciencia y Tecnología de Alimentos, 2011.

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