Método de trazabilidad del kit de detección de actividad de alfa - cetovalerato deshidrogenasa

α-Cetovalerato deshidrogenasaα-KGDH) instrucciones del kit de detección activa
Método de trazabilidad
Nota: los reactivos de este producto han cambiado, por favor, preste atención y siga estrictamente las instrucciones.
Número de artículo:BC0715
especificación:100T/96S
Composición del producto: antes de usarlo, verifique cuidadosamente si el volumen del reactivo es consistente con el volumen de la botella. si tiene alguna pregunta, Póngase en contacto con el personal de solebao a tiempo.

Preparación de la solución:

1. Reactivo 2: es un reactivo volátil, sellado lo antes posible después de usarlo y conservado a - 20 ℃;

2. Reactivo 5: tome un reactivo 5 antes del uso temporal y agregue1Reactivo ML 3, completamente disuelto, reactivo interminable2 - 8℃guardar4Zhou;

3. Reactivo 6: tome un reactivo 6 antes del uso temporal y agregue1.5Reactivo ML 3, completamente disuelto, reactivo interminableConservación en paquetes a - 20 ° C4Zhou, evitar la congelación y el deshielo repetidos;

4. Reactivo 7: tome un reactivo 7 antes del uso temporal y agregue1Reactivo ML 3, completamente disuelto, reactivo interminableConservación en paquetes a - 20 ° C4Semana, evite la congelación y descongelación repetidas (se puede hacer después de disolver 1 polvo)100TPara prolongar el tiempo de uso, este producto da más1Polvo de rama);

5. Reactivo 8: tome un reactivo 8 antes del uso temporal y agregue0,4 mlAgua destilada, completamente disuelta, reactivos interminables-20℃Embalaje y conservación4Zhou, evitar la congelación y el deshielo repetidos;

6. Preparación del líquido de trabajo: tomar 8,05 a su vez antes del uso temporalReactivo ML iii,0.2 mlReactivos IV.1mlReactivos v.1.25mlReactivos vi.0.5mlReactivo siete(total11ml, aproximadamente55T(...)Está completamente mezclado y listo para usar, y está listo para usar.

Descripción del producto:
α-KGDH()EC 1.2.4.2Ampliamente presente en las mitocondrias de animales, microorganismos vegetales y células cultivadas, es una de las enzimas clave para la regulación del ciclo del ácido tricarboxilico, que catalizaα-La Descarboxilación oxidativa del ácido cetovalerico produce succiniloA.
α-KGDHCatálisisα-Cetovalerato,NAD^{- sí.}Y auxiliares * a generan succinilo auxiliaresA, dióxido de carbono yNADH,NADHEn340 nmHay picos de absorción característicos paraNADHRepresentación de la tasa de generaciónα-KGDHActividad.

Nota: antes del experimento, se recomienda seleccionar 2 - 3 muestras con grandes diferencias esperadas para el experimento previo. Si el valor de absorción de la muestra no está dentro del rango de medición, se recomienda diluir o aumentar el tamaño de la muestra para la prueba.
Instrumentos y suministros propios:
Espectrómetro ultravioleta / medidor estándar enzimático, olla de baño de agua/.Incubadora de temperatura constante, centrífuga de mesa, pipeta ajustable, placa de Petri de cuarzo traza/ 96agujeroUVTablas, morteros/.Homogeneizador, hielo y agua destilada.
Pasos de operación:Los pasos operativos específicos se detallan en el anexo "información del producto".

1. Todos los reactivos y muestras se colocan sobre hielo durante la determinación para evitar la desnaturalización y la inactivación.

2. La temperatura del líquido de reacción en la placa de Petri debe mantenerse a 37 ° c o25℃Tomar un vaso de precipitados pequeño y cargar una cierta cantidad.37℃O25℃Agua destilada, pon este vaso de precipitados37℃O25℃En una olla de baño de agua. Durante la reacción, la placa de Petri se coloca en este vaso de precipitados junto con el líquido de reacción.

3. Es mejor que dos personas hagan este experimento al mismo tiempo, una persona compare el color y una persona cronometra para garantizar la precisión de los resultados del experimento.

4. Tubo de determinaciónΔAValor en0,01 - 0,25Entre, si se determina el tuboΔAEl valor es mayor que0.25Es necesario diluir la muestra.

5. Debido a que el extracto contiene una cierta concentración de proteínas (aproximadamente 1 mg / ml), es necesario restar el contenido de proteínas del propio extracto al determinar la concentración de proteínas de la muestra.

Ejemplos experimentales:

1. Tomar 0,1 g de cizaña para el tratamiento de muestrasDespués de tomar el sobrenadante y diluirlo dos vecesSiga los pasos de determinación y mida con una placa de Petri de cuarzo traza.CálculoΔADeterminación=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128,ΔAvacío=A2-A1=0，La actividad de la enzima se calcula por la masa de la muestra:

α-KGDHActividad(masa u / g)= 1488,5×(ΔA)Determinación-ΔAvacío÷W×2(múltiplo de dilución)=381.056 U/gCalidad.

1. Tomar 0,1g de hígado de ratón para el tratamiento de muestras,Centrifugación de 11000 G a 4 ° C10 minutosDespués de recoger la limpiezaSiga los pasos de determinación y mida con una placa de Petri de cuarzo traza.CálculoΔADeterminación=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500,ΔAvacío=A2-A1=0，La actividad de la enzima se calcula por la masa de la muestra:

α-KGDHActividad(masa u / g)= 1488,5×(ΔA)Determinación-ΔAvacío÷W = 3721,25 U/gCalidad.
Documentos publicados relevantes:

1. Jianyun Yue, Changjian Du, Jing Ji, et al. Inhibición de La actividad de la α-cetoglutarato deshidrogenasa afecta al crecimiento de la raíz álamo vía cambios en Shunt GABA. Planta. julio 2018; (IF3.06)

2. Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, et al. lncRNA Ftx promueve la glicólisis aeróbica y la progresión tumoral a través de la vía PPARγ en el carcinoma hepatocelular. Revista Internacional de Oncología. mayo de 2018; (IF3.571)

Referencias:
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Tinción cuantitativa de la actividad de la alfa-cetoglutarato deshidrogenasa en secciones cerebrales y en células cultivadas [J]. Bioquímica analítica, 2000, 277(1): 86-93.
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