Kit de detección de Luciferasa nluc

La enzima nluc Luciferasa es una enzima de moléculas pequeñas modificada por ingeniería genética (19,1 kda) y es una proteína genética reportera de bioluminiscencia con propiedades de Zhuo yue. Es aproximadamente 150 veces más brillante que las luciérnagas (photinus piralis) o la Luciferasa de riñón marino, y el uso de un nuevo similar a la Coenzima (furimazina) puede producir señales luminosas de alta intensidad y luminosas. La respuesta luminosa no depende de ATP y, al mismo tiempo, obtiene la mayor sensibilidad de detección al inhibir la señal luminosa de fondo.
El nluc Reporter Gene Assey Kit proporciona un reactivo sencillo y que se puede agregar de una sola vez, con características de alta sensibilidad, que puede generar señales fuertes en presencia de la enzima nluc luciferina.
Componentes del producto:

1. materiales propios:
PBS； Múltiples disparos; Placa de cultivo de células blancas opacas / negras; Medidor de Quimioluminiscencia o estándar enzimático.
2. preparación antes de la prueba:
(1) colocar previamente el sustrato de detección nluc (50 ×) y el amortiguador del sustrato de detección nluc a temperatura ambiente.
(2) de acuerdo con el uso real, mezcle la cantidad adecuada de sustrato de detección nluc (50 ×) con el tampón de sustrato de detección nluc en una proporción de 1: 50, y evite la luz a temperatura ambiente. Por ejemplo: si se necesitan 10 ml de líquido de reacción, se necesitan agregar 0,2 ml de sustrato de detección.
Nota: se recomienda que se utilice ahora, y no se recomienda que el líquido de reacción restante que contiene el nuevo sustrato se mantenga después del final del experimento.
3. método de operación:
(1) extraer la placa de cultivo celular de la Caja de cultivo celular, colocarla durante 5 - 15 minutos y recuperarla a temperatura ambiente.
Nota: utilice una placa de cultivo celular blanca opaca o negra para reducir la interferencia de señal entre los poros.
(2) añadir solución de detección
Utilizando una pistola de drenaje múltiple, se añade a cada agujero celular un líquido de reacción que contiene un sustrato equilibrado a temperatura ambiente, y el volumen de muestra es el mismo que el volumen del medio de cultivo celular y se mezcla bien. Por ejemplo, la placa de 96 agujeros suele agregar un medio de cultivo de 80 - 100 μl y, en consecuencia, una solución de detección de 80 μl - 100 μl; La placa de 384 agujeros generalmente se agrega con un medio de cultivo de 20 - 30 μl y una solución de detección de 20 - 30 μl en consecuencia.
(3) detección luminosa
Después de mezclar bien, se detecta la actividad genética reportera de la Luciferasa nluc en un medidor de Quimioluminiscencia o un medidor de estándar enzimático.
Nota: para obtener los mejores resultados de la prueba, complete la prueba dentro de una hora después de agregar el reactivo de prueba.
4. análisis de datos:
(1) diseño experimental: de acuerdo con los diferentes propósitos experimentales, se deben establecer grupos de control, grupos experimentales y grupos de control en blanco en cada placa de cultivo. Para garantizar la precisión del experimento, en teoría, cada grupo experimental (incluido el Grupo de control) debe restar la medición de luminosidad de la Luciferasa en el Grupo de control en blanco.
① Grupo de control en blanco:
Fondo f: células no transferidas + líquido de reacción.
Nota: el Grupo de control en blanco debe tener el mismo tamaño de muestra que la muestra experimental, contener la misma combinación de medio de cultivo / suero que la muestra experimental y agregar el mismo reactivo de detección que wan.
② Grupo experimental: las células injertadas fueron tratadas por compuestos experimentales (es decir, el grupo experimental f).
③ Grupo de control: las células injertadas no fueron tratadas para estandarizar los resultados (es decir, el Grupo de control f).
(2) resultados del cálculo:
Grupo Experimental = Grupo Experimental F - Fondo f.
Grupo de control = Grupo de control F - Fondo f.
Múltiplo de expresión = Grupo experimental / Grupo control.

Se conserva a - 20 ° C y tiene una validez de un año. El sustrato de detección nluc (50 ×) se recomienda empaquetar y conservar a - 80 ℃.

1. la reacción enzimática es más sensible a la temperatura, y todos los reactivos deben equilibrarse a temperatura ambiente (20 - 25 ° c) antes de agregar la prueba de muestra antes de reutilizarlos;
2. al detectar, es necesario usar una placa de 96 agujeros blanca o negra. Si se utilizan placas de 96 agujeros transparentes ordinarias, se producirá interferencia mutua entre los agujeros adyacentes;
3. instrumentos de detección: los instrumentos que pueden detectar la Quimioluminiscencia son aplicables, pero debido a las diferentes configuraciones y sensibilidades de los diferentes instrumentos, los valores de señal óptica medidos también serán diferentes;
4. para la determinación por fluorescencia de un solo tubo, el tiempo entre cada muestra y el reactivo de determinación debe ser consistente después de la mezcla y antes de la determinación;
5. para su propia seguridad, haga un buen trabajo de protección efectiva antes del experimento;