Método de trazabilidad de la Caja de prueba de glucosa Oxigenasa (god)

Kit de prueba de glucosa Oxigenasa (god)
Método de trazabilidad
Número de artículo:BC0695
Especificaciones:100T/96S

Contenido del producto:
Extracto:100 ml × 1 botella de líquido, conservada a 4 ° c;
Reactivo 1:Líquido 15 ML × 1 botella, conservado a 4 ° c;
Reactivo 2:3 ML × 1 botella de líquido, conservada a 4 ° c;
Reactivo 3:1 ML × 1 unidad de líquido, conservado a - 20 ℃, se puede empacar y conservar después de derretirse.

Descripción del producto:
El God (ec 1.1.3.4), ampliamente presente en animales y plantas, cataliza la oxidación de la glucosa para producir ácido glucónico y produce H 2 o 2, que es una de las vías metabólicas por las que los organismos producen oxígeno vivo.
El Dios cataliza la glucosa para producir H 2 o 2, y el oxígeno producido por la descomposición de H 2 o 2 catalizada por la peroxidasa en presencia aeróbica oxida la o - anís - Amina para producir sustancias no ferrosas, y la profundidad del color es lineal con la actividad de la glucosa oxigenasa.

Se necesita equipo e instrumentos propios.
Espectrómetro visible / estándar enzimático, olla de baño de agua, centrífuga de mesa, pipeta ajustable, placa de Petri de microcolor / 96 placa de agujero, mortero, hielo y agua destilada

Pasos de operación
I. preparación para la determinación de muestras
1. tratamiento de tejidos: pesar unos 0,1 g de tejido y añadir 1 ml de extracto para homogeneizar el baño de hielo; 8000g 4 ℃ se centrifuga durante 10 minutos, se extrae y se coloca sobre hielo para su prueba.
2. suero (plasma): detección directa.
II. pasos de determinación
1. el espectrómetro o el medidor estándar enzimático se precalienta durante más de 30 minutos, se ajusta la longitud de onda a 500 nm y el agua destilada se ajusta a cero.
2. preparación del líquido de trabajo god: mezcle bien 15 ml de reactivo uno más 3 ml de reactivo dos y ajuste el pH 5.1 (ahora disponible).
3. tabla de muestra:
Tubo de determinación del nombre del reactivo (μl)
Líquido de trabajo God 174
Reactivo 3 6
Mezclar bien, 37 ° c (mamíferos) o 25 ° c (otras especies) baño de agua 5 min
Muestra 20
Antes de la determinación de la muestra, coloque el líquido de trabajo God y el reactivo 3 en un baño de agua a 37 ° C para mantenerlos calientes, y luego agregue el reactivo anterior a la relación de trazas en orden.
En la placa de Petri / 96 agujeros, se comienza a cronometrar mientras se agregan muestras; La absorción inicial A1 a 20 segundos y la absorción A2 a 1 minuto y 20 segundos se registran a una longitud de onda de 500 nm. se calcula△ a = A2 - A1.
III. cálculo de las unidades de vitalidad del Dios
La fórmula de cálculo para la determinación con una placa de Petri de cuarzo traza es la siguiente:
1. cálculo de la vitalidad del Dios en los tejidos animales
(1) calculado en función de la concentración de proteínas
Definición de la unidad: cada mg de proteína tisular produce catalíticamente 1 μmol de o - anís oxidativo por minuto en el sistema de reacción, que se define como una unidad de actividad enzimática.
God (u / mg proto) = △ a ÷ (epsilon × d) × V anti total ÷ (cpr × muestra v) ÷ t = 1333 × △ a ÷ CPR
(2) calculado por el peso fresco de la muestra
Definición de la unidad: la producción catalítica de 1 μmol de o - anís oxidativo por minuto por tejido g en el sistema de reacción se define como una unidad de actividad enzimática.
God (u / g peso fresco) = △ a ÷ (epsilon × d) × V anti total ÷ (w ÷ V extracción × muestra v) ÷ t = 1333 × △ a ÷ W
2. cálculo de la vitalidad de la go sérica (pulpa)
Definición de la unidad: cada ml de suero (pulpa) produce catalíticamente 1 μmol de o - anís oxidativo por minuto en el sistema de reacción, que se define como una unidad de actividad enzimática.
God (u / ml) = △ a ÷ d ÷ Epsilon × V anti total ÷ t ÷ V muestra = 1333 × △ a
V anti - total: volumen total de reacción, 0,2 ml; muestra v: añadir volumen de muestra, 0,02 ml; extracción v, añadir volumen de extracción,
1 ml; cpr: concentración de proteínas de la muestra, mg/mL； W: peso fresco de la muestra, g; d: diámetro de la luz, 1cm; epsilon: coeficiente de extinción de la o - anfetamina oxidada, 7,5 × 10 - 3 ml / μmol / cm; T: tiempo de reacción, 1 min.
La fórmula de cálculo determinada con una placa de 96 agujeros es la siguiente:
1. cálculo de la vitalidad del Dios en los tejidos animales
(1) calculado en función de la concentración de proteínas
Definición de la unidad: cada mg de proteína tisular produce catalíticamente 1 μmol de o - anís oxidativo por minuto en el sistema de reacción, que se define como una unidad de actividad enzimática.
God (u / mg proto) = △ a ÷ (epsilon × d) × V anti total ÷ (cpr × muestra v) ÷ t = 2222 × △ a ÷ CPR
(2) calculado por el peso fresco de la muestra
Definición de la unidad: la producción catalítica de 1 μmol de o - anís oxidativo por minuto por tejido g en el sistema de reacción se define como una unidad de actividad enzimática.
God (u / g peso fresco) = △ a ÷ (epsilon × d) × V anti total ÷ (w ÷ V extracción × muestra v) ÷ t = 2222 × △ a ÷ W
2. cálculo de la vitalidad de la go sérica (pulpa)
Definición de la unidad: cada ml de suero (pulpa) produce catalíticamente 1 μmol de o - anís oxidativo por minuto en el sistema de reacción, que se define como una unidad de actividad enzimática.
God (u / ml) = △ a ÷ d ÷ Epsilon × V anti total ÷ t ÷ V muestra = 2222 × △ a
V anti - total: volumen total de reacción, 0,2 ml; muestra v: volumen de muestra añadido, 0,02 ml; cpr: concentración de proteínas de la muestra, mg/mL；
W: peso fresco de la muestra, g; d: diámetro de la luz, 0,6 cm; epsilon: coeficiente de extinción de la o - anfetamina oxidada, 7,5 × 10 - 3 ml / μmol / cm; T: tiempo de reacción, 1 min.
1. la vitalidad de God es diferente en diferentes tejidos homogéneos. antes de hacer un ensayo formal, haga 1 - 2 preexamen, si A2 - A1 > 1,
Esto indica que la vitalidad del tejido es demasiado alta y que se debe diluir con un extracto en una concentración adecuada de suero homogéneo para que A2 - A1 sea inferior a 1.
Para mejorar la sensibilidad de la detección.
Si se produce un fenómeno A1 > A2 durante el experimento, diluya la muestra con un extracto a la concentración adecuada.
2. dos buenas personas hacen este experimento al mismo tiempo, una persona compara el color y una persona cronometra para garantizar la precisión de los resultados del experimento.
3. este Kit solo es adecuado para tejidos animales y suero animal (pulpa).

Método de trazabilidad de la Caja de prueba de glucosa Oxigenasa (god) Método de trazabilidad de la Caja de prueba de glucosa Oxigenasa (god)