El kit de Elisa del receptor de IL - 7 (soluble) es una herramienta utilizada para detectar cuantitativamente el contenido del receptor de IL - 7 soluble en muestras biológicas y es ampliamente utilizado en investigación inmunológica y otros campos.
Receptor de la IL - 7 (soluble) Kit Elisa
Receptor de la IL - 7 (soluble) Kit ElisaEs una herramienta utilizada para detectar cuantitativamente el contenido de receptores de IL - 7 solubles en muestras biológicas y es ampliamente utilizada en investigación inmunológica y otros campos.
Principio de detección: se utilizó el método Elisa de doble sándwich de anticuerpos. Las microporos del kit han sido preenvasadas con anticuerpos específicos contra el receptor de IL - 7 soluble. Cuando se añade la muestra, el receptor de IL - 7 soluble en la muestra se une a anticuerpos sólidos. Posteriormente, se añade el anticuerpo receptor de IL - 7 antisoluble marcado por la enzima, que forma un complejo de "anticuerpo sólido - receptor de IL - 7 soluble - anticuerpo estándar enzimático" con el receptor que se ha unido a la fase sólida. Después de un paso de lavado para eliminar la sustancia no unida, se añade una solución de sustrato (como tmb), bajo la catálisis de una enzima, el sustrato produce una reacción de color, y la profundidad del color es proporcional al contenido del receptor de IL - 7 soluble en la muestra. La absorción se mide a una longitud de onda específica (generalmente 450 nm) a través de un medidor de estándar enzimático, y en comparación con la curva estándar, se puede calcular la concentración de este receptor en la muestra.
Composición del kit
Placa de enlace enzimático: 96 o 48 agujeros, preenvasados con anticuerpos contra el receptor de IL - 7 soluble, son portadores de la reacción.
Productos estándar: generalmente liofilizado, hay 2 botellas. Antes de su uso temporal, es necesario volver a disolver y diluir con una dilución estándar en diferentes gradientes de concentración, como 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, etc., para dibujar la curva estándar.
Muestra Xi liberación de líquido: se utiliza para diluir muestras a medir con concentraciones excesivas para garantizar que su concentración esté dentro del rango de detección del kit.
Anticuerpos marcados con enzimas: es decir, el anticuerpo receptor de IL - 7 antisoluble marcado por hrp, que es un concentrado, debe diluirse con una dilución de anticuerpos estándar enzimático según sea necesario.
Diluyente de anticuerpos estándar enzimático: se utiliza específicamente para diluir anticuerpos estándar enzimáticos.
Solución de sustrato: por ejemplo, el sustrato tmb puede reaccionar con HRP en el anticuerpo estándar enzimático para producir cambios de color.
detergente líquido: por lo general, es un concentrado, que debe diluirse proporcionalmente con agua destilada o desionizada para lavar la placa de enlace enzimático, eliminar sustancias no combinadas y reducir la interferencia de fondo.
Líquido de terminación: la mayoría de ellos son soluciones ácidas fuertes (como el ácido sulfúrico), que se utilizan para detener la reacción de color del sustrato, para que el color del líquido de reacción sea estable y fácil de leer.
Película de sellado: se utiliza para cubrir la placa de unión enzimática durante el proceso de calentamiento para evitar la evaporación de líquidos y la contaminación externa.
Manual de instrucciones: detalles sobre el uso del kit, precauciones, indicadores de rendimiento, etc.
Requisitos de la muestra
Suero: después de recoger la sangre, se coloca a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, se centrifuga 1000 × G durante 20 minutos y se retira para su uso posterior. La recolección de sangre debe utilizar equipos desechables sin pirógeno y sin lps.
Plasma: se pueden usar Anticoagulantes como EDTA y heparina. Dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección de la muestra, se centrifuga 1000 × G a 2 - 8 ° C durante 15 minutos y se extrae el líquido superior.
Sobrenadante de cultivo celular: centrifugar el sobrenadante de cultivo celular 1000 × G durante 20 minutos, eliminar los fragmentos celulares y las impurezas y extraer el sobrenadante.
Homogeneización de tejidos: lavar el tejido con PBS preconfriados, eliminar la sangre residual, cortar el tejido y añadir PBS de acuerdo con 1: 9 (w / v), y moler completamente en el Hielo. Después de 5 - 10 minutos de centrifugación de 5000 × g, se extrae el líquido superior para la detección.
Si se detecta a corto plazo después de la recolección de la muestra, se puede conservar a 4 ° c; Si se conserva durante mucho tiempo, es necesario congelar a - 20 ° c o - 80 ° c, y evitar el deshielo repetido, las muestras de Hemólisis generalmente no son adecuadas para la detección.
procedimiento operativo
Preparativos: retire el kit del refrigerador y equilibre a temperatura ambiente (unos 30 minutos). Diluir el detergente concentrado.
Añadir muestra: establecer agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra. El agujero en blanco se agrega con una muestra XI para liberar la solución, el agujero estándar se agrega con una concentración diferente de productos estándar, el agujero de muestra se agrega con una muestra tratada, la cantidad de muestra por agujero suele ser de 100 μl, se mezcla suavemente y se cultiva a 37 ° C durante 90 minutos.
Lavado: deseche el líquido del agujero, llene los agujeros con un detergente, remoje durante 1 - 2 minutos y revuelva seco, lave repetidamente 5 veces para asegurarse de lavar la sustancia no unida.
Añadir anticuerpos estándar enzimáticos: añadir 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos estándar enzimáticos diluido a cada agujero y incubarlo a 37 ° C durante 60 minutos.
Lavar de nuevo: los mismos pasos de lavado anteriores.
Color: añadir 90 μl de solución de sustrato por agujero, mezclar suavemente y evitar la luz y el color a 37 ° C durante 15 - 30 minutos (juzgar por la situación real de color).
Terminación de la respuesta: añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero, cuando el color de la solución cambia de azul a amarillo.
Lectura: dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de terminación, se mide la Absorbancia (valor de od) de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático.
Resultados del cálculo: dibuja la curva estándar tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. De acuerdo con el valor de od de la muestra, se detecta la concentración correspondiente de la curva estándar. si la muestra se diluye, se debe multiplicar por el múltiplo de dilución correspondiente para obtener la concentración real.
Indicadores de rendimiento
Alcance de la detección: los intervalos comunes son 31,2 - 2000 pg / ml, que pueden satisfacer las necesidades de detección del contenido de receptores de IL - 7 solubles en una variedad de muestras.
sensibilidad: puede ser tan bajo como 15,6 pg / ML o incluso más bajo, y puede detectar trazas de este receptor en la muestra.
Especificidad: Tiene una alta especificidad para los receptores de IL - 7 solubles y no tiene reacciones cruzadas obvias con otros receptores de citoquinas y otras sustancias.
Repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es generalmente inferior al 10%, y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%, lo que garantiza la estabilidad y fiabilidad de los resultados de las pruebas.
Precauciones
Siga estrictamente las instrucciones, y los diferentes lotes de kits no se pueden mezclar.
Utilice una cabeza de succión desechable durante la Operación para evitar la contaminación cruzada y agregar muestras con precisión.
El lavado adecuado es la clave para garantizar resultados precisos, y el lavado sin fondo de che puede conducir fácilmente a falsos positivos.
La solución del sustrato es sensible a la luz y debe conservarse y usarse para evitar la luz, y la reacción de color debe llevarse a cabo en condiciones de protección de la luz.
El líquido de terminación es corrosivo, preste atención a la protección durante la operación y evite el contacto con la piel y los ojos.
Se recomienda que tanto los estándares como las muestras se sometan a pruebas de agujeros múltiples para mejorar la precisión de los resultados. El kit se utiliza solo para la investigación científica y no para el diagnóstico clínico.
