El kit de Elisa del receptor de IL - 6 (soluble), que utiliza el método de Elisa de doble sándwich, cuantifica con precisión los receptores solubles en muestras como el suero, es fácil de operar y ampliamente utilizado en la investigación científica.
Receptor de IL - 6 (soluble) Kit Elisa
Receptor de IL - 6 (soluble) Kit ElisaDiseñado para la detección cuantitativa del contenido de receptores de IL - 6 solubles en muestras biológicas, es de gran importancia para la investigación inmunológica e inflamatoria en el campo de la investigación científica.
Principio de detección: basado en el método de inmunoabsorción enzimática sandwich de doble anticuerpo. La placa de unión enzimática está preenvasada con anticuerpos específicos contra el receptor de IL - 6 soluble. Después de la incorporación de la muestra, el receptor de IL - 6 soluble en ella se une a anticuerpos sólidos. Posteriormente, se añadieron anticuerpos contra el receptor de IL - 6 soluble marcados por la enzima para formar un complejo de "anticuerpos sólidos - receptor de IL - 6 soluble - anticuerpos marcados por la enzima". Después de lavar, se elimina el sin unión, se añade una solución de sustrato (como tmb) y el sustrato se colorea bajo catálisis enzimática, y la profundidad del color es proporcional al contenido del receptor en la muestra. La absorción se midió a una longitud de onda de 450 nm a través de un medidor de estándar enzimático y se comparó con la curva estándar para obtener la concentración del receptor de IL - 6 soluble en la muestra.
Composición del kit
Placa de enlace enzimático: Tiene una especificación de 96 o 48 agujeros, preenvasada con anticuerpos, que es el portador de la reacción.
Productos estándar: generalmente liofilizado, es necesario volver a disolver y diluir en una serie de gradientes de concentración con una dilución estándar, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, para dibujar la curva estándar.
Muestra Xi liberación de líquido: se utiliza para diluir muestras a medir con concentraciones excesivas, de modo que la concentración de la muestra se adapte al rango de detección del kit.
Anticuerpos marcados con enzimas: es decir, el anticuerpo receptor de IL - 6 antisoluble marcado por hrp, que es un concentrado, debe diluirse según sea necesario con una dilución de anticuerpos estándar enzimático.
Diluyente de anticuerpos estándar enzimático: se utiliza específicamente para diluir anticuerpos estándar enzimáticos.
Solución de sustrato: como un sustrato tmb, la reacción con HRP en el anticuerpo estándar enzimático produce cambios de color.
detergente líquido: generalmente es un concentrado, que se diluye proporcionalmente con agua destilada o desionizada para lavar la placa de enlace enzimático, eliminar las sustancias no vinculadas y reducir la interferencia de fondo.
Líquido de terminación: la mayoría son soluciones ácidas fuertes (como el ácido sulfúrico), que se utilizan para detener la reacción de color del sustrato y estabilizar el color del líquido de reacción para la lectura.
Película de sellado: cubrir la placa de unión enzimática durante el calentamiento para evitar la evaporación del líquido y la contaminación externa.
Manual de instrucciones: detalles sobre el método de uso, precauciones, indicadores de rendimiento, etc.
Requisitos de la muestra
Suero: después de la recolección de sangre, se coloca a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, se centrifuga 1000 × G durante 20 minutos para extraer el suero, y la recolección de sangre requiere un equipo desechable sin pirógeno y sin lps.
Plasma: se puede anticoagular con edta, heparina, etc. dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección de la muestra, se puede extraer el suero después de 15 minutos de centrifugación de 1000 × G a 2 - 8 ° c.
Sobrenadante de cultivo celular: centrifugación 1000 × G durante 20 minutos, eliminación de fragmentos celulares e impurezas y extracción de líquido cefalorraquídeo para su detección.
Homogeneización de tejidos: lavar el tejido con PBS preconfriados (0,01m, pH = 7,4), eliminar la sangre residual, cortar el tejido y añadir PBS de acuerdo con 1: 9 (w / v), moler completamente sobre hielo y centrifugar 5000 × G durante 5 - 10 minutos para limpiarlo.
Si se detecta a corto plazo después de la recolección de la muestra, se puede conservar a 4 ° c; La conservación a largo plazo requiere - 20 ° c o - 80 ° C de congelación, y evitar la congelación y deshielo repetidos, las muestras de Hemólisis generalmente no son adecuadas para la detección.
procedimiento operativo
Preparativos: retire el kit del refrigerador, equilibre a temperatura ambiente (unos 30 minutos) y diluya el detergente concentrado.
Añadir muestra: establecer agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra. El agujero en blanco se agrega con una muestra XI para liberar líquido, el agujero estándar se agrega con una concentración diferente de productos estándar, el agujero de la muestra se agrega con una muestra tratada, la cantidad de muestra por agujero suele ser de 100 μl, se mezcla suavemente y se cultiva a 37 ° C durante 90 minutos.
Lavado: deseche el líquido del agujero, llene los agujeros con un detergente, remoje durante 1 - 2 minutos y revuelva seco, lave repetidamente 5 veces para asegurarse de lavar la sustancia no unida.
Añadir anticuerpos estándar enzimáticos: añadir 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos estándar enzimáticos diluido por agujero y criar a 37 ° C durante 60 minutos.
Lavar de nuevo: repita los pasos de lavado anteriores.
Color: añadir 90 μl de solución de sustrato por agujero, mezclar suavemente y evitar la luz y el color a 37 ° C durante 15 - 30 minutos (juzgar por la situación real de color).
Terminación de la respuesta: añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero, y el color de la solución cambia de azul a amarillo.
Lectura: dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de terminación, la absorción de luz (valor de od) de cada agujero se mide en una longitud de onda de 450 nm con un medidor de enzima.
Resultados del cálculo: dibuja la curva estándar con la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. De acuerdo con el valor de od de la muestra, se detecta la concentración correspondiente de la curva estándar. si la muestra se diluye, se debe multiplicar por el múltiplo de dilución correspondiente para obtener la concentración real.
Indicadores de rendimiento
Alcance de la detección: el rango común es de 15,6 - 1000 pg / ml, que satisface las necesidades de detección de una variedad de muestras.
sensibilidad: puede ser tan bajo como 7,8 pg / ML o incluso más bajo, y puede detectar trazas de receptores de IL - 6 solubles.
Especificidad: altamente específico para este receptor y casi sin reacciones cruzadas con otros receptores de citoquinas, entre otros.
Repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es generalmente inferior al 10%, y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%, lo que garantiza que los resultados de las pruebas sean estables y confiables.
