El kit de Elisa del receptor de IL - 6, que utiliza la tecnología de Elisa de doble anti - sándwich, puede cuantificar con precisión el receptor de IL - 6 en muestras como el suero, lo que facilita la operación y ayuda a la investigación científica.
Receptor de IL - 6 Kit Elisa
Receptor de IL - 6 Kit ElisaEs una herramienta utilizada en la investigación científica para detectar cuantitativamente el contenido de receptores de IL - 6 en muestras biológicas. La IL - 6r desempeña un papel clave en el proceso de inmunomodulación e inflamación, y la detección de su contenido es de gran importancia para la investigación relacionada.
Principio de detección: la mayoría de los kits utilizan el método de inmunoabsorción enzimática sándwich de doble anticuerpo. Los anticuerpos específicos contra la IL - 6r se preenvasan en la placa de enlace enzimático. Después de agregar la muestra, la IL - 6r en la muestra se une específicamente a los anticuerpos sólidos. A continuación se añaden los anticuerpos anti - IL - 6r marcados por la enzima, que forman un complejo de "anticuerpos sólidos - IL - 6r - anticuerpos estándar enzimáticos" con la IL - 6r que se ha unido a los anticuerpos sólidos. Después de un lavado completo para eliminar la sustancia no unida, se añade una solución de sustrato (como tmb), bajo la catálisis de una enzima, el sustrato produce una reacción de color, y la profundidad del color es proporcional al contenido de IL - 6r en la muestra. La absorción se mide a una longitud de onda específica (generalmente 450 nm) a través de un medidor estándar enzimático, y la concentración de IL - 6r en la muestra se calcula en comparación con la curva estándar.
Composición del kit
Placa de enlace enzimático: 96 o 48 agujeros, preenvasados con anticuerpos anti - IL - 6r, son portadores de la reacción.
Productos estándar: por lo general, es un producto liofilizado, con 2 botellas. Antes de su uso temporal, es necesario volver a disolver con una dilución estándar y diluirla en diferentes gradientes de concentración, como 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, etc., para dibujar la curva estándar.
Muestra Xi liberación de líquido: se utiliza para diluir muestras a medir con concentraciones excesivas para garantizar que la concentración de la muestra esté dentro del rango de detección del kit.
Anticuerpos marcados con enzimas: es decir, el anticuerpo anti - IL - 6r marcado por hrp, que es un concentrado, debe diluirse con una dilución de anticuerpos estándar enzimático según sea necesario.
Liberación de anticuerpos marcados con enzima XI: se utiliza específicamente para diluir anticuerpos estándar enzimáticos.
Solución de sustrato: por ejemplo, el sustrato tmb puede reaccionar con HRP en el anticuerpo estándar enzimático para producir cambios de color.
detergente líquido: por lo general, es un concentrado que debe diluirse proporcionalmente con agua destilada o desionizada para lavar la placa de enlace enzimático, eliminar sustancias no combinadas y reducir la interferencia de fondo.
Líquido de terminación: la mayoría de ellos son soluciones ácidas fuertes (como el ácido sulfúrico), que se utilizan para detener la reacción de color del sustrato, para que el color del líquido de reacción sea estable y fácil de leer.
Película de sellado: se utiliza para cubrir la placa de unión enzimática durante el proceso de calentamiento para evitar la evaporación de líquidos y la contaminación externa.
Manual de instrucciones: detalles sobre el uso del kit, precauciones, indicadores de rendimiento, etc.
Requisitos de la muestra
Suero: después de recoger la sangre, se coloca a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, y luego se centrifuga durante 20 minutos a 1000 × G para su posterior limpieza. La recolección de sangre debe utilizar equipos desechables sin pirógeno y sin lps.
Plasma: se puede usar ácido edta, heparina, etc. como anticoagulantes. Dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección de la muestra, se centrifuga a 1000 × G a 2 - 8 ° C durante 15 minutos y se extrae.
Sobrenadante de cultivo celular: centrifugar el sobrenadante de cultivo celular a 1000 × G durante 20 minutos, eliminar los fragmentos celulares y las impurezas, y extraer el sobrenadante para la detección.
Homogeneización de tejidos: lavar los tejidos con un tampón fosfórico preconfriado (pbs, 0,01m, pH = 7,4) y eliminar la sangre residual. Después de cortar el tejido, se agregó el PBS en una proporción de aproximadamente 1: 9 (w / v) y se molió completamente sobre el Hielo. Después de 5 - 10 minutos de centrifugación de 5000 × g, se extrae el líquido superior para la detección.
Si se detecta a corto plazo después de la recolección de la muestra, se puede conservar a 4 ° c; Si se necesita conservar durante mucho tiempo, se debe congelar a - 20 ° c o - 80 ° c, y se debe evitar el deshielo repetido, las muestras de Hemólisis generalmente no son adecuadas para la detección.
procedimiento operativo
Preparativos: retire el kit del refrigerador y equilibrarlo a temperatura ambiente con 30 minutos de antelación. Al mismo tiempo, el detergente concentrado se diluye en agua destilada o desionizada en la proporción requerida para su uso posterior.
Añadir muestra: establecer agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra. El agujero en blanco se agrega a la muestra XI para liberar la solución, el agujero estándar se agrega a diferentes concentraciones de productos estándar, el agujero de muestra se agrega a la muestra tratada, la cantidad de muestra por agujero suele ser de 100 μl, se mezcla suavemente y se cultiva a 37 ° C durante 90 minutos.
Lavado: después de la educación a temperatura, abandone el líquido en el agujero, llene los agujeros con un detergente, remoje durante 1 - 2 minutos y revuelva seco, repita el lavado 5 veces para asegurarse de que el Fondo che se lave sin unión.
Añadir anticuerpos estándar enzimáticos: añadir 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos estándar enzimáticos diluido a cada agujero y incubarlo a 37 ° C durante 60 minutos.
Lavar de nuevo: repita los pasos de lavado anteriores.
Color: añadir 90 μl de solución de sustrato por agujero, mezclar suavemente y evitar la luz y el color a 37 ° C durante 15 - 30 minutos (se debe juzgar de acuerdo con la situación real de color).
Terminación de la respuesta: añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero, cuando el color de la solución cambia de azul a amarillo.
Lectura: dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de terminación, se mide la Absorbancia (valor de od) de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático.
Resultados del cálculo: dibuja la curva estándar tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. De acuerdo con el valor de od de la muestra, se detecta la concentración correspondiente de la curva estándar. si la muestra se diluye, debe multiplicarse por el múltiplo de dilución correspondiente para obtener la concentración real.
Indicadores de rendimiento
Alcance de la detección: los diferentes kits son diferentes, el rango de detección común es de 31,2 - 2000 pg / ML y otros intervalos, que pueden satisfacer las necesidades de detección del contenido de IL - 6r en una variedad de muestras.
sensibilidad: por lo general, puede ser tan bajo como 15,6 pg / ML o incluso más bajo, y puede detectar trazas de IL - 6r en la muestra.
Especificidad: Tiene una alta especificidad para la IL - 6r y casi no tiene reacciones cruzadas con otros receptores de citoquinas y otras sustancias.
Repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es generalmente inferior al 10%, y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%, lo que garantiza la estabilidad y fiabilidad de los resultados de las pruebas.
Precauciones
Siga estrictamente las instrucciones, y los reactivos de diferentes lotes de kits no se pueden mezclar.
Durante la operación, se utiliza una cabeza de succión desechable para evitar la contaminación cruzada, y la adición de muestras debe ser precisa.
El lavado adecuado es la clave para garantizar resultados precisos, y el lavado sin fondo puede conducir fácilmente a resultados falsos positivos.
La solución del sustrato es sensible a la luz y debe conservarse y usarse para evitar la luz, y la reacción de color debe llevarse a cabo en condiciones de protección de la luz.
El líquido de terminación es corrosivo, preste atención a la protección durante la operación y evite el contacto con la piel y los ojos.
Se recomienda que tanto los estándares como las muestras se sometan a pruebas de agujeros múltiples para mejorar la precisión de los resultados. El kit se utiliza solo para fines científicos y no para diagnóstico clínico.
