El kit de Elisa de IL - 7 utiliza el método de Elisa de doble sándwich de anticuerpos, que puede cuantificar con precisión la IL - 7 en muestras como suero, es fácil de operar y es ampliamente utilizado en inmunología y otros campos de investigación científica.
Il - 7 Kit Elisa
Il - 7 Kit ElisaEs una herramienta de detección comúnmente utilizada en la investigación científica para la determinación cuantitativa del contenido de IL - 7 en muestras biológicas. La IL - 7 es una proteína secretada soluble del tamaño de 25 KDA codificada por el gen de la IL - 7, que pertenece a la familia de factores hematopoyéticos y desempeña un papel clave en la diferenciación, proliferación y supervivencia de los linfocitos. El kit puede ayudar a la investigación de mecanismos de enfermedades relacionadas, investigación y desarrollo de medicamentos y otros trabajos.
Composición del kit
Placa de enlace enzimático: 96 o 48 agujeros, preenvasados con anticuerpos anti - IL - 7 como portadores de la reacción.
Productos estándar: por lo general, es un producto liofilizado, generalmente hay 2 botellas. Antes de su uso temporal, es necesario volver a disolver con una dilución estándar y diluirla en diferentes gradientes de concentración, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, etc., para dibujar la curva estándar.
Muestra Xi liberación de líquido: se utiliza para diluir muestras a medir con concentraciones excesivas para garantizar que su concentración esté dentro del rango de detección efectivo del kit.
Anticuerpos marcados con enzimas: es decir, el anticuerpo anti - IL - 7 marcado por hrp, que es un concentrado, debe diluirse con una dilución de anticuerpos estándar enzimático según sea necesario.
Diluyente de anticuerpos estándar enzimático: se utiliza específicamente para diluir anticuerpos estándar enzimáticos.
Solución de sustrato: por ejemplo, un sustrato tmb puede reaccionar con HRP en un anticuerpo estándar enzimático, produciendo así cambios de color.
detergente líquido: por lo general, es un concentrado, que debe diluirse con agua destilada o desionizada en una proporción específica cuando se utiliza para lavar la placa de enlace enzimático, eliminar sustancias no combinadas y reducir eficazmente la interferencia de fondo.
Líquido de terminación: la mayoría de ellas son soluciones ácidas fuertes (como el ácido sulfúrico), que se utilizan para detener la reacción de color del sustrato, estabilizar el color del líquido de reacción y facilitar las lecturas posteriores.
Película de sellado: se utiliza para cubrir la placa de unión enzimática durante el proceso de calentamiento para evitar la evaporación de líquidos y la contaminación externa.
Manual de instrucciones: detalles sobre el uso del kit, precauciones, indicadores de rendimiento, etc.
Requisitos de la muestra
Suero: después de recoger la sangre, Déjela a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, y luego centrifugarla durante 20 minutos con 1000 × g, absorba cuidadosamente el líquido sobrenadante para su uso posterior. La recolección de sangre debe utilizar equipos desechables sin pirógeno y sin lps.
Plasma: se puede usar ácido edta, heparina, etc. como anticoagulantes. Dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección de la muestra, se centrifuga a 1000 × G a 2 - 8 ° C durante 15 minutos y se extrae.
Sobrenadante de cultivo celular: centrifugar el sobrenadante de cultivo celular a 1000 × G durante 20 minutos, eliminar los fragmentos celulares y las impurezas, y extraer el sobrenadante para la detección.
Homogeneización de tejidos: lavar los tejidos con un tampón fosfórico preconfriado (pbs, 0,01m, pH = 7,4) y eliminar la sangre residual en el Fondo che. Después de cortar el tejido, se agregó el PBS en una proporción de aproximadamente 1: 9 (w / v) y se molió completamente sobre el Hielo. Después de 5 - 10 minutos de centrifugación de 5000 × g, se extrae el líquido superior para la detección.
Después de la recolección de la muestra, si se detecta a corto plazo, se puede conservar a 4 ° c; Si se necesita conservar durante mucho tiempo, se debe congelar a - 20 ° c o - 80 ° c, y se debe evitar el deshielo repetido, las muestras de Hemólisis generalmente no son adecuadas para la detección.
procedimiento operativo
Preparativos: retire el kit del refrigerador y equilibrarlo a temperatura ambiente con 30 minutos de antelación. Al mismo tiempo, el detergente concentrado se diluye en agua destilada o desionizada en la proporción requerida para su uso posterior.
Añadir muestra: establecer agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra. El agujero en blanco se agrega a la muestra XI para liberar la solución, el agujero estándar se agrega a diferentes concentraciones de productos estándar, el agujero de muestra se agrega a la muestra tratada, la cantidad de muestra por agujero suele ser de 100 μl, se mezcla suavemente y se cultiva a 37 ° C durante 90 minutos.
Lavado: después de la educación a temperatura, abandone el líquido en el agujero, llene los agujeros con un detergente, remoje durante 1 - 2 minutos y revuelva seco, repita el lavado 5 veces para asegurarse de que el Fondo che se lave sin unión.
Añadir anticuerpos estándar enzimáticos: añadir 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos estándar enzimáticos diluido a cada agujero y incubarlo a 37 ° C durante 60 minutos.
Lavar de nuevo: repita los pasos de lavado anteriores.
Color: añadir 90 μl de solución de sustrato por agujero, mezclar suavemente y evitar la luz y el color a 37 ° C durante 15 - 30 minutos (se debe juzgar de acuerdo con la situación real de color).
Terminación de la respuesta: añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero, cuando el color de la solución cambia de azul a amarillo.
Lectura: dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de terminación, se mide la Absorbancia (valor de od) de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático.
Resultados del cálculo: dibuja la curva estándar tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. De acuerdo con el valor de od de la muestra, se detecta la concentración correspondiente de la curva estándar. si la muestra se diluye, debe multiplicarse por el múltiplo de dilución correspondiente para obtener la concentración real.
Indicadores de rendimiento
Alcance de la detección: los diferentes kits son diferentes, el rango de detección común es de 15,6 - 1000 pg / ML y otros intervalos, que pueden satisfacer las necesidades de detección del contenido de IL - 7 en una variedad de muestras.
sensibilidad: por lo general, puede ser tan bajo como 7,8 pg / ML o incluso más bajo, y puede detectar trazas de IL - 7 en la muestra.
Especificidad: altamente específico para la IL - 7 y casi sin reacciones cruzadas con otras citocinas y otras sustancias.
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Repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es generalmente inferior al 10%, y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%, lo que garantiza la estabilidad y fiabilidad de los resultados de las pruebas.
