El kit de Elisa de IL - 6 utiliza el método de Elisa de doble sándwich para cuantificar con precisión la IL - 6 en muestras como el suero, que es fácil de operar y proporciona datos clave para la investigación científica sobre inmunidad e inflamación.
Il - 6 Kit Elisa
Il - 6 Kit ElisaEs una herramienta utilizada para detectar cuantitativamente el contenido de IL - 6 en muestras biológicas y es ampliamente utilizada en inmunología, investigación inflamatoria y otros campos de investigación científica. Aquí está su introducción:
Principio de detección: se utilizó la tecnología Elisa sándwich de doble anticuerpo. La placa de enlace enzimático en el kit ha sido preenvasada con anticuerpos específicos contra la IL - 6. Después de agregar la muestra, la IL - 6 en la muestra se une específicamente a los anticuerpos sólidos para formar un complejo de antígenos y anticuerpos. Posteriormente, se añaden anticuerpos anti - IL - 6 marcados por la enzima, que se unen aún más a la IL - 6 que se ha unido a los anticuerpos sólidos, formando una estructura sándwich de "anticuerpos sólidos - anticuerpos estándar de la enzima IL - 6". Después del paso de lavado, se elimina la sustancia no unida y se añade una solución de sustrato (como tmb). Bajo la catálisis de la enzima, el sustrato produce una reacción de color, y la profundidad del color es proporcional al contenido de IL - 6 en la muestra. La concentración de IL - 6 en la muestra se puede calcular midiendo la absorción a una longitud de onda específica (generalmente 450 nm) a través de un medidor estándar enzimático, en comparación con la curva estándar.
Composición del kit
Placa de enlace enzimático: Tiene una especificación de 96 o 48 agujeros, preenvasada con anticuerpos anti - IL - 6, que es el portador de la reacción.
Productos estándar: generalmente es un producto liofilizado, generalmente hay 2 botellas. Antes de su uso temporal, es necesario volver a disolver con una dilución estándar y diluirla en diferentes gradientes de concentración, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, etc., para dibujar la curva estándar.
Muestra Xi liberación de líquido: se utiliza para diluir las muestras a probar con concentraciones excesivas para garantizar que la concentración de la muestra esté dentro del rango de detección del kit.
Anticuerpos marcados con enzimas: es decir, el anticuerpo anti - IL - 6 marcado por hrp, que es un concentrado, debe diluirse según sea necesario con una dilución de anticuerpos estándar enzimático.
Diluyente de anticuerpos estándar enzimático: se utiliza específicamente para diluir anticuerpos estándar enzimáticos.
Solución de sustrato: como un sustrato tmb, reacciona con HRP en el anticuerpo estándar enzimático para producir cambios de color.
Detergente: la mayoría de ellos son concentrados, que deben diluirse proporcionalmente con agua destilada o desionizada para lavar la placa de enlace enzimático, eliminar sustancias no combinadas y reducir la interferencia de fondo.
Líquido de terminación: generalmente es una solución de ácido fuerte (como el ácido sulfúrico), que se utiliza para detener la reacción de color del sustrato, para que el color del líquido de reacción sea estable y fácil de leer.
Película de sellado: cubrir la placa de enlace enzimático durante el proceso de calentamiento para evitar la evaporación del líquido y la contaminación externa.
Manual de instrucciones: detalles sobre el uso del kit, precauciones, indicadores de rendimiento, etc.
Requisitos de la muestra
Suero: después de recoger la sangre, se coloca a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, se centrifuga 1000 × G durante 20 minutos y se retira para su uso posterior. La recolección de sangre debe utilizar equipos desechables sin pirógeno y sin lps.
Plasma: se pueden usar Anticoagulantes como el ácido EDTA y la heparina. Dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección de la muestra, se centrifuga 1000 × G a 2 - 8 ° C durante 15 minutos y se extrae el líquido superior.
Sobrenadante de cultivo celular: centrifugar el sobrenadante de cultivo celular 1000 × G durante 20 minutos, eliminar los fragmentos celulares y las impurezas, y extraer el sobrenadante para la detección.
Homogeneización de tejidos: lavar los tejidos con un tampón fosfórico preconfriado (pbs, 0,01m, pH = 7,4) y eliminar la sangre residual. Después de cortar el tejido, añadir PBS de acuerdo con 1: 9 (w / v) y moler completamente en el Hielo. Después de 5 - 10 minutos de centrifugación de 5000 × g, se extrae el líquido superior para la detección.
Si se detecta a corto plazo después de la recolección de la muestra, se puede conservar a 4 ° c; Si se necesita conservar durante mucho tiempo, se debe congelar a - 20 ° c o - 80 ° c, y se debe evitar la congelación y descongelación repetidas, las muestras de Hemólisis generalmente no son adecuadas para la detección.
Proceso de operación
Preparativos: retire el kit del refrigerador y equilibre a temperatura ambiente con 30 minutos de antelación. Al mismo tiempo, el detergente concentrado se diluye en agua destilada o desionizada en la proporción requerida para su uso posterior.
Añadir muestra: establecer agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra. El agujero en blanco se agrega a la muestra XI para liberar la solución, el agujero estándar se agrega a diferentes concentraciones de productos estándar, el agujero de muestra se agrega a la muestra tratada, la cantidad de muestra por agujero suele ser de 100 μl, se mezcla suavemente y se cultiva a 37 ° C durante 90 minutos.
Lavado: después de la educación a temperatura, abandone el líquido en el agujero, llene los agujeros con un detergente, remoje durante 1 - 2 minutos y revuelva seco, repita el lavado 5 veces para asegurarse de que el Fondo che se lave sin unión.
Añadir anticuerpos estándar enzimáticos: añadir 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos estándar enzimáticos diluido a cada agujero y incubarlo a 37 ° C durante 60 minutos.
Lavar de nuevo: repita los pasos de lavado anteriores.
Color: añadir 90 μl de solución de sustrato por agujero, mezclar suavemente y evitar la luz y el color a 37 ° C durante 15 - 30 minutos (se debe juzgar de acuerdo con la situación real de color).
Terminación de la respuesta: añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero, cuando el color de la solución cambia de azul a amarillo.
Lectura: dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de terminación, se mide la Absorbancia (valor de od) de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático.
Resultados del cálculo: dibuja la curva estándar tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. De acuerdo con el valor de od de la muestra, se detecta la concentración correspondiente de la curva estándar. si la muestra se diluye, debe multiplicarse por el múltiplo de dilución correspondiente para obtener la concentración real.
Indicadores de rendimiento
Alcance de la detección: los diferentes kits son diferentes, el rango de detección común es de 15,6 - 1000 pg / ML y otros intervalos, que pueden satisfacer las necesidades de detección del contenido de IL - 6 en una variedad de muestras.
Sensibilidad: por lo general, puede ser tan bajo como 7,8 pg / ML o incluso más bajo, y puede detectar trazas de IL - 6 en la muestra.
Especificidad: altamente específico para la IL - 6 y casi sin reacciones cruzadas con otras citocinas y otras sustancias.
Repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es generalmente inferior al 10%, y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%, lo que garantiza la estabilidad y fiabilidad de los resultados de las pruebas.
