El kit de Elisa del receptor de IL - 5 (soluble), que utiliza la tecnología de Elisa de doble sándwich, cuantifica con precisión el receptor en muestras como suero, es fácil de operar y ayuda a la investigación en inmunología y otros campos de investigación científica.
Receptor de la IL - 5 (soluble) Kit Elisa
Receptor de la IL - 5 (soluble) Kit ElisaEs una herramienta utilizada para detectar cuantitativamente el contenido de receptores de IL - 5 solubles en muestras biológicas y desempeña un papel importante en el campo de la investigación científica, ayudando a comprender en profundidad los procesos fisiopatológicos, como la inmunomodulación y la respuesta inflamatoria. Lo siguiente te presenta desde muchos aspectos:
Principio de detección: se utiliza la técnica de inmunoabsorción enzimática sandwich de doble anticuerpo (elisa). La placa de unión enzimática del kit está preenvasada con anticuerpos específicos contra el receptor de IL - 5 soluble. Cuando se añade la muestra, el receptor de IL - 5 soluble en la muestra se une específicamente a los anticuerpos sólidos. A continuación se añade el anticuerpo receptor de IL - 5 antisoluble marcado por la enzima, que forma un complejo de "anticuerpo sólido - receptor de IL - 5 soluble" con el receptor que se ha unido al anticuerpo sólido. Después de un lavado adecuado, se elimina la sustancia no unida y luego se añade una solución de sustrato (como 3,3 ', 5,5' - tetrametilbifenilamina, es decir, tmb). Bajo la catálisis de la enzima en el anticuerpo estándar enzimático, el sustrato produce una reacción de color, y la profundidad del color es proporcional al contenido del receptor de IL - 5 soluble en la muestra. La concentración de este receptor en la muestra se puede calcular midiendo la Absorbancia a una longitud de onda específica (generalmente 450 nm) a través de un medidor estándar enzimático y comparándola con la curva estándar.
Composición del kit
Placa de enlace enzimático: Tiene una especificación de 96 o 48 agujeros, ha sido preenvasada con anticuerpos contra el receptor de IL - 5 soluble y es el vector de la reacción.
Productos estándar: por lo general, es un producto liofilizado, generalmente equipado con 2 botellas. Antes de su uso temporal, es necesario volver a disolver con una dilución estándar y diluirla en diferentes gradientes de concentración, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, etc., para dibujar la curva estándar.
Muestra Xi liberación de líquido: se utiliza para diluir muestras a medir con concentraciones excesivas para garantizar que la concentración de la muestra esté dentro del rango de detección efectivo del kit.
Anticuerpos marcados con enzimas: es decir, el anticuerpo receptor de IL - 5 antisoluble marcado por HRP (superóxidasa de rábano picante), que es un concentrado, debe diluirse con una dilución de anticuerpos estándar enzimático según sea necesario.
Diluyente de anticuerpos estándar enzimático: se utiliza específicamente para diluir anticuerpos estándar enzimáticos.
Solución de sustrato: por ejemplo, un sustrato tmb puede reaccionar con HRP en un anticuerpo estándar enzimático, produciendo así cambios de color.
Detergente: por lo general, es un concentrado, que debe diluirse en un cierto porcentaje con agua destilada o desionizada para lavar la placa de enlace enzimático, eliminar sustancias no combinadas y reducir la interferencia de fondo.
Líquido de terminación: la mayoría de ellos son soluciones ácidas fuertes (como el ácido sulfúrico), que se utilizan para detener la reacción de color del sustrato, para que el color del líquido de reacción sea estable y fácil de leer.
Película de sellado: cubrir la placa de enlace enzimático durante el proceso de calentamiento para evitar la evaporación del líquido y la contaminación externa.
Manual de instrucciones: detalles sobre el uso del kit, precauciones, indicadores de rendimiento, etc.
Requisitos de la muestra
Suero: después de recoger la sangre, se coloca a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, y luego se centrifuga durante 20 minutos a 1000 × G para su posterior limpieza. La recolección de sangre debe utilizar equipos desechables sin pirógeno y sin lps.
Plasma: se puede usar ácido edta, heparina, etc. como anticoagulantes. Dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección de la muestra, se centrifuga a 1000 × G a 2 - 8 ° C durante 15 minutos y se extrae.
Sobrenadante de cultivo celular: centrifugar el sobrenadante de cultivo celular a 1000 × G durante 20 minutos, eliminar los fragmentos celulares y las impurezas, y extraer el sobrenadante para la detección.
Homogeneización de tejidos: lavar los tejidos con un tampón fosfórico preconfriado (pbs, 0,01m, pH = 7,4) y eliminar la sangre residual. Después de cortar el tejido, se agregó el PBS en una proporción de aproximadamente 1: 9 (w / v) y se molió completamente sobre el Hielo. Después de 5 - 10 minutos de centrifugación de 5000 × g, se extrae el líquido superior para la detección.
Si se detecta a corto plazo después de la recolección de la muestra, se puede conservar a 4 ° c; Si se necesita conservar durante mucho tiempo, se debe congelar a - 20 ° c o - 80 ° c, y se debe evitar la congelación y descongelación repetidas, las muestras de Hemólisis generalmente no son adecuadas para la detección.
Proceso de operación
Preparativos: retire el kit del refrigerador y equilibrarlo a temperatura ambiente con 30 minutos de antelación. Al mismo tiempo, el detergente concentrado se diluye en agua destilada o desionizada en la proporción requerida para su uso posterior.
Añadir muestra: establecer agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra. El agujero en blanco se agrega a la muestra XI para liberar la solución, el agujero estándar se agrega a diferentes concentraciones de productos estándar, el agujero de muestra se agrega a la muestra tratada, la cantidad de muestra por agujero suele ser de 100 μl, se mezcla suavemente y se cultiva a 37 ° C durante 90 minutos.
Lavado: después de la educación a temperatura, abandone el líquido en el agujero, llene los agujeros con un detergente, remoje durante 1 - 2 minutos y revuelva seco, repita el lavado 5 veces para asegurarse de que el Fondo che se lave sin unión.
Añadir anticuerpos estándar enzimáticos: añadir 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos estándar enzimáticos diluido a cada agujero y incubarlo a 37 ° C durante 60 minutos.
Lavar de nuevo: repita los pasos de lavado anteriores.
Color: añadir 90 μl de solución de sustrato por agujero, mezclar suavemente y evitar la luz y el color a 37 ° C durante 15 - 30 minutos (se debe juzgar de acuerdo con la situación real de color).
Terminación de la respuesta: añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero, cuando el color de la solución cambia de azul a amarillo.
Lectura: dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de terminación, se mide la Absorbancia (valor de od) de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático.
Resultados del cálculo: dibuja la curva estándar tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. De acuerdo con el valor de od de la muestra, se detecta la concentración correspondiente de la curva estándar. si la muestra se diluye, debe multiplicarse por el múltiplo de dilución correspondiente para obtener la concentración real.
