Células receptoras dh5 a Lambda PIR

Células receptoras dh5 a Lambda PIR

Nombre del producto: dh5 Alfa Lambda PIR Chemical competent Cell
Número de producto: g6018 - 10 (10 unidades 100ul), g6018 - 100 (100 unidades 100ul)
Especificaciones / perfiles: g6018 - 10 (10 unidades 100ul), g6018 - 100 (100 unidades 100ul)

Genotipo

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA--arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ-thi -1 gyrA96 relAl phoA

Breve descripción

La CEPA de entrada de clbio dh5a en el PIR proviene del dh5a, que introduce lampir en el genoma de E. coli del dh5a, es decir, dh5a en el pir, una cepa que puede expresar la proteína pir, lo que permite que los plásmidos que contienen replicones r6kg ORI se replicen normalmente en él. La CEPA de entrada de dh5a PIR carece de endonucleasa de ácido nucleico (enda), lo que mejora la producción y la calidad del ADN plasmídico; El tipo defectuoso de la enzima recombinante (reca) reduce la probabilidad de Recombinación homóloga de los fragmentos insertados y garantiza la estabilidad de la inserción de adn; La presencia de laczoom15 permite que dh5a se utilice en la detección de manchas azules y blancas; Sin embargo, la tasa de crecimiento de la CEPA de entrada de dh5a en el PIR es más lenta, y el tiempo de crecimiento debe prolongarse cuando se cultiva en tabletas o sacudidas líquidas. Las células receptoras clbio dh5a Lambda PIR fueron producidas por un proceso especial, y la eficiencia de transformación del plasmídeo puc19 fue superior a 1x109 CFU / μg de adn.

Instrucciones de operación:

1. las células receptoras dh5a Lambda PIR se sacan de - 80 ° C y se introducen rápidamente en el Hielo. después de 5 minutos, se espera que el bloque se derrita. se agrega el ADN objetivo (plasmídeo o producto de conexión) y se mezcla con el Fondo del tubo EP a Mano. se deja reposar en el hielo durante 25 minutos.

2.42 * C el baño de agua se calienta durante 45 segundos y se devuelve rápidamente al Hielo. Sube y deja reposar durante 2 minutos, y el temblor reducirá la eficiencia de conversión.

3. añadir 700 μ1 medio de cultivo LB estéril sin antibióticos al tubo centrífuga, mezclar a 37 ° C y reanimar a 200 RPM durante 70 minutos.

4. centrifugar 5000 RPM durante 1 minuto para recoger los hongos, dejar alrededor de 100 μl de suero superior y soplar suavemente los bloques de hongos pesados y aplicarlos al medio LB que contiene los antibióticos correspondientes.

5. coloque la tableta boca abajo en una incubadora a 37 ° C durante al menos 18 horas.

Precauciones:

1. células receptorassugerenciaSe derrite lentamente en el Hielo. Añadir ADN objetivo dentro de los 8 minutos siguientes a la inserción en el hielo no se puede colocar en el hielo durante demasiado tiempo, y el almacenamiento prolongado reducirá la eficiencia de conversión.

2. la CEPA dh5a Lambda PIR crece lentamente y el tiempo de crecimiento de la bacteria debe prolongarse (37 ° c, más de 18 horas) al cultivar o sacudir la bacteria líquida en una placa plana.

3. la transformación de plásmidos de alta concentración o productos de conexión de alta eficiencia puede reducir la cantidad de bacterias que finalmente se utilizan para recubrir la placa en consecuencia.

Células receptoras dh5 a Lambda PIR