Método de trazabilidad del kit de detección de la actividad de la síntesis de almidón Unido

Método de trazabilidad del kit de detección de la actividad de la síntesis de almidón Unido

Nota: asegúrese de tomar antes de la determinación formal2 - 3Se hacen predicciones de muestras con grandes diferencias esperadas.

Número de artículo：BC3295

Especificaciones:100T/96S

Contenido del producto:

Extracto:100 ml × 1 botella de líquido, conservada a 4 ° c;

Reactivo 1: 30 ML × 1 botella, conservado a 4 ° c;

Reactivo 2: polvo × 1 botella, conservado a 4 ° c;

Reactivo 3: polvo × 1 botella, - 20 ℃ conservado;

Reactivo 4: polvo × 2 botellas, conservado a 4 ° c; Añadir 5 ml de reactivo antes de su uso temporal y mezclarlo completamente para su uso posterior;

Reactivo 5: polvo × 1 botella, conservado a 4 ° c; Añadir 10 ml de reactivo antes de su uso temporal y mezclarlo completamente para su uso posterior;

Reactivo 6: polvo × 1 unidad, - 20 ℃ conservado; Añadir 500 μl de agua de doble vapor antes del uso temporal y disolverla completamente para su uso posterior;

Reactivo 7: 250 μl × 2 ramas de líquido, conservado a - 20 ℃;

Reactivo 8: líquido 12,5 μl × 2 ramas; Antes de cada uso temporal, agregue el reactivo disuelto de 4ml 4.

Líquido de reacciónⅠPreparación:Antes de su uso temporal, agregue 14 ml de reactivo 1 al reactivo 2, caliente lentamente, caliente gradualmente para disolverlo, y después de enfriarlo, agregue el reactivo 3 para mezclar y disolverlo. Esto se puede preparar y determinar en dos lotes.

Descripción del producto:

Gbss (ec 2.4.1.21) está presente en el almidón en un Estado atado, catalizando la reacción de alargamiento de la cadena de almidón y siendo el principal responsable de la síntesis de amilosa.

Gbss cataliza la reacción de adpg con el primer de almidón (glucano) para transferir moléculas de glucosa al primer de almidón y generar ADP al mismo tiempo; Además, el nadp se cataliza sucesivamente a través de la quinasa pirúvica, la Hexoquinasa y la 6 - fosfato de glucosa deshidrogenasa añadidas al sistema de reacción.^{- sí.}Se reduce a nadph, en el que la generación de nadph es proporcional a la cantidad de ADP generada por la reacción anterior, y la actividad de gbss se puede calcular determinando el aumento de nadph a 340 nm.

Instrumentos y suministros propios:

Espectrómetro ultravioleta / estándar enzimático, baño de agua, centrífuga de mesa, pipeta ajustable, placa de Petri de cuarzo traza / 96 placa de agujero (placa ultravioleta), mortero, hielo y agua destilada.

Pasos de operación:

I. preparación de enzimas gruesas

Pesar alrededor de 0,1 g de tejido y añadir 1 ml de extracto, homogeneizado en baño de Hielo. 10000g ， Centrifugar a 4 ° C durante 10 minutos, descartarlo y agregar 1 ml de extracto a la precipitación para mezclar completamente y colocarlo en hielo para su prueba.

II. pasos de determinación

1. el espectrómetro o el medidor estándar enzimático se precalienta durante más de 30 minutos, se ajusta la longitud de onda a 340 nm y el agua destilada se ajusta a cero.

2. añadir los siguientes reactivos en el tubo EP en orden

Inmediatamente después de mezclar, se transfiere una placa colorimétrica de cuarzo de 200 μl o una placa de 96 agujeros, se registra la absorción inicial A1 a una longitud de onda de 340 nm y la absorción A2 después de 2 minutos, y se calcula△ a = A2 - A1.

Atención:Si hay precipitación en el reactivo 2, debe disolverse y mezclarse completamente antes de añadirlo.

En tercer lugar,GBSSCálculo de la actividad

a.La fórmula de cálculo para la determinación utilizando una placa de Petri de cuarzo traza es la siguiente:

1. según la concentración de proteínas de la muestra:

Definición de la unidad: cada mg de proteína tisular produce catalíticamente 1 nmol nadph por minuto en un sistema de reacción de 1 ml, que se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad gbss (u / mg proto) = [△ a ÷ (epsilon × d) × prueba v] ÷ (cpr × muestra V ÷ V anti - total × V shangqing) ÷ t = 432 × △ a ÷ CPR

Este método requiere determinar la concentración de proteínas de la muestra por sí mismo.

2. calculado de acuerdo con el peso fresco de la muestra

Definición de la unidad: la producción catalítica de 1 nmol nadph por minuto por tejido g en un sistema de reacción de 1 ML se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad gbss (u / g de peso fresco) = [△ a ÷ (epsilon × d) × V medida × 10⁹△ (w ÷ V extracción × muestra V ÷ V anti - total × V shangqing) ÷ t = 432 × △ a ÷ W.

Medición v: volumen medido, 0,26 M l; Muestra v: añadir el volumen de la muestra, 0,1 ml; V anti total: volumen de reacción, 0,31 ml; V shangqing: volumen de shangqing añadido, 0,15 ml; V extracción: volumen de extracción añadido, 1 × 10^-3L; epsilon: coeficiente de extinción molecular nadph, 6,22 × 10^-3mL/nmoL/cm； D: diámetro de la placa de petri, 1 cm; t: tiempo de reacción, 2 min; Cpr: concentración de proteínas de la muestra, mg/mL； W: calidad de la muestra, g。

b.usar96La fórmula de cálculo para la determinación de la placa de agujero es la siguiente:

1. según la concentración de proteínas de la muestra:

Definición de la unidad: cada mg de proteína tisular produce catalíticamente 1 nmol nadph por minuto en el sistema de reacción como una unidad de actividad enzimática.

Actividad gbss (u / mg proto) = [△ a ÷ (epsilon × d) × prueba v] ÷ (cpr × muestra V ÷ V anti - total × V shangqing) ÷ t = 720 × △ a ÷ cpr.

Este método requiere determinar la concentración de proteínas de la muestra por sí mismo.

2. calculado de acuerdo con el peso fresco de la muestra

Definición de la unidad: la producción catalítica de 1nmol nadph por minuto por tejido g en el sistema de reacción se define como una unidad de actividad enzimática.

Actividad gbss (u / g de peso fresco) = [△ a ÷ (epsilon × d) × V medida] ÷ (w ÷ V extracción × V muestra ÷ V anti - total × V shangqing) ÷ t = 720 × △ a ÷ W.

Medición v: volumen medido, 0,26 M l; Muestra v: añadir el volumen de la muestra, 0,1 ml; V anti total: volumen de reacción, 0,31 ml; V shangqing: volumen de shangqing añadido, 0,15 ml; V extracción: volumen de extracción añadido, 1 × 10^-3L; epsilon: coeficiente de extinción molecular nadph, 6,22 × 10^-3mL/nmoL/cm； D: diámetro de la placa de petri, 1 cm; t: tiempo de reacción, 2 min; Cpr: concentración de proteínas de la muestra, mg/mL； W: calidad de la muestra, g。

Método de trazabilidad del kit de detección de la actividad de la síntesis de almidón UnidoInstrucciones de pedido:

1. la mayoría de los productos están disponibles al contado y, en general, se pueden ordenar y enviar el mismo día.
2. algunos productos no convencionales deben reservarse con 1 - 2 días de antelación, mientras que los futuros en el extranjero deben reservarse con 3 - 6 semanas de antelación.
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5. después de tramitar el pago, por favor, Llámenos el pedido de fondo, junto con la dirección, el nombre y así sucesivamente del destinatario, por fax, mensaje de texto, etc.

Instrucciones de transporte:

Productos de temperatura extremadamente baja: se instala hielo seco durante el transporte de productos de temperatura extremadamente baja. Envolver el producto con hielo seco y sellarlo con una caja de espuma, pegarlo con cinta adhesiva capa por capa, colocarlo en la Caja de solebao y luego entregarlo a un servicio de mensajería cooperativo, que entrega a los clientes de manera segura, rápida, eficiente y segura, para garantizar que la naturaleza del producto sea estable como la misma y escoltar su experimento.
Productos de baja temperatura: durante el transporte de productos de baja temperatura, se instalan bolsas de hielo solebao para el transporte. Envuelva el producto en una bolsa de hielo con antelación, luego Selle con una caja de espuma, Selle firmemente la Caja de espuma con cinta adhesiva, luego Póngalo en la Caja de solebao (el efecto de aislamiento térmico puede durar menos de una semana), y luego Póngalo en manos de un cliente de mensajería cooperativa, segura, rápida, eficiente y segura, para garantizar que la naturaleza del producto sea estable y escoltar su experimento.
Productos a temperatura ambiente: no es necesario agregar hielo o envases especiales durante el transporte de productos a temperatura ambiente. Los productos son distribuidos rápidamente por el personal del almacén de la empresa, y la entrega urgente precisa, rápida y eficiente garantiza que los productos lleguen rápidamente a sus manos.