Kit de detección de actividad del inhibidor de la esterasa de butilo Bilis

Instrucciones del kit de detección de actividad del inhibidor de la esterasa de butilo Bilis

Método de fotometría visible

Número de artículo:BC5980

Especificaciones:50T/48S

Composición del producto: antes de usarlo, verifique cuidadosamente si el volumen del reactivo es consistente con el volumen de la botella. si tiene alguna pregunta, Póngase en contacto con el personal de solebao a tiempo.

Preparación de la solución:

1. reactivo 1: tome 1 reactivo 1 antes de usarlo y agregue1,8 mlAgua destilada, completamente disuelta, reactivos interminables-20℃Se puede guardar después del embalaje.4Semanas, evite la congelación y descongelación repetidas (el reactivo es un reactivo liofilizado, que puede tener una gran diferencia o incluso una pequeña cantidad de reactivos observados a simple vista entre diferentes botellas, lo que no afecta el uso y la misma calidad real).

2. reactivo 4: añadir 17 ml de reactivo 2 antes del uso temporal, disolver completamente, reactivo interminable-20℃Se puede empacar y guardar4Zhou, evite la congelación y el deshielo repetidos.

3. reactivo 5: solución de 10 mmol / L de rivastigmina. Antes de la aplicación temporal, tome una solución clara de 15 μl de 10 mmol / L de Rivas y agregue 985μLAgua destilada, preparada0.15La solución Ming de mmol / L de Rivas se prepara ahora (este reactivo se utiliza en experimentos de tubos positivos, seleccionados).

Descripción del producto:

Butyrylcolinesterasa (butyrylcolinesterasa,BchE,EC3.1.1.8), también conocido como bilis * esterasa plasmática, pseudobilis * esterasa, es una enzima de Hidrolasa ácida de seda, sintetizada por el hígado y que entra en la sangre y está presente en casi todos los tejidos animales. Con acetilbilis * esterasa..AchE) en comparación,BchEPuede hidrolizar eficazmente los ésteres biliares más grandes, como la bilis de butilo * y la bilis de benzoilo *, y puede eliminar los efectos tóxicos de agentes nerviosos como los pesticidas organofosforados y los pesticidas de carbamato. Hay estudios que muestran que,BchEPuede servir como un objetivo importante para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer.BchELos inhibidores se utilizan para mejorar la pérdida de memoria, la disfunción cognitiva y otros síntomas en pacientes con enfermedad de alzheimer.

El Bche cataliza la polimerización de la bilis de butilo * para formar la bilis *, la bilis * se genera por la acción del ácido dithionitrobenzoico (dtnb)5 -Sulfhídrico-ácido nitrobenzoicoTNB),BchEInhibidores por inhibiciónBchEActividad, reducción de la degradación de la bilis de butilo *.TNBEn412nmHay picos de absorción en el lugar, que se pueden determinar412nmCambios en la absorción local, se calcula la actividad del inhibidor bche.

Nota: antes del experimento, se recomienda seleccionar 2 - 3 muestras con grandes diferencias esperadas para el experimento previo.

Instrumentos y suministros propios:

Espectrómetro visible, balanza, horno, triturador / mortero/.Homogeneizador,30 - 50Tamiz de ojos, limpiador ultrasónico, centrífuga, olla de baño de agua/.Incubadora de temperatura constante,1 mlPlaca de Petri de vidrio, pistola de transferencia de líquido ajustable, hielo y agua destilada.

Pasos de operación: para los pasos de operación específicos, consulte el documento "información del producto"

Precauciones:

1. para garantizar la precisión y estabilidad de los resultados experimentales, controle estrictamente el tiempo de reacción y el tiempo de operación.

2. absorción de la muestra a "_{Determinación}Superior a 1,5 oΔA_{Determinación}AcercarseΔA_vacíoAl mismo tiempo, se recomienda aumentar la proporción de muestras de tejido en los pasos de procesamiento de muestras o preparar muestras de polvo en soluciones de mayor concentración antes de la determinación. CuandoΔA_{Determinación}Cuando sea inferior a 0,01, la muestra se puede diluir con un extracto antes de la determinación.

3. si se utiliza para comparar el grado de inhibición del Bche por diferentes reactivos, extractos, medicamentos o tejidos, se debe preparar un reactivo, extracto, medicamento o homogeneizado de tejidos en la misma concentración para la comparación.

Ejemplos experimentales:

1. tome una muestra de cáscara de pomelo de 01005g (seca) y agregue1 mlEl líquido de extracción se extrae por ultrasonido, se extrae después de la centrifugación y se opera de acuerdo con los pasos de determinación.1 mlMedición y cálculo de la placa de Petri de vidrio:ΔA_vacío=..A»_{En blanco 1}-A_{En blanco 1}) - ()A»_{Vacío 2}-A_{Vacío 2}) =..1372 - 0205(...)-（0166 - 0112(...)= 1113,ΔA_{Determinación}=..A»_{Determinación}-A_{Determinación}) - ()A»_{Vacío 2}-A_{Vacío 2}) =..117 - 0485(...)-（0166 - 0112(...)= 0578Para calcular la tasa de inhibición:

Tasa de inhibición del inhibidor de bche..Porcentaje(...)=（113 - 0578(...)△ 113 × 100% = 48068%.

2. tome una muestra de cáscara de caqui de 01014g (seca) y agregue1 mlEl extracto se extrae por ultrasonido, se extrae después de la centrifugación y se diluye.16Después de multiplicar, siga los pasos de determinación y use1 mlMedición y cálculo de la placa de Petri de vidrio:ΔA_vacío=..A»_{En blanco 1}-A_{En blanco 1}) - ()A»_{Vacío 2}-A_{Vacío 2}) =..1372 - 0205(...)-（0166 - 0112(...)= 1113,ΔA_{Determinación}=..A»_{Determinación}-A_{Determinación}) - ()A»_{Vacío 2}-A_{Vacío 2}) =..0706 - 0149(...)-（0166 - 0112(...)= 0503Para calcular la tasa de inhibición:

Tasa de inhibición del inhibidor de bche..Porcentaje(...)=（113 - 0503(...)△ 113 × 100% = 54807%.

3. tome una solución clara de 50 μl de 0,15 mmol / L de rivas, siga los pasos de determinación y use1 mlMedición y cálculo de la placa de Petri de vidrio:ΔA_vacío=..A»_{En blanco 1}-A_{En blanco 1}) - ()A»_{Vacío 2}-A_{Vacío 2}) =..1372 - 0205(...)-（0166 - 0112(...)= 1113,ΔA_{Determinación}=..A»_{Determinación}-A_{Determinación}) - ()A»_{Vacío 2}-A_{Vacío 2}) =..0838 - 0171(...)-（0166 - 0112(...)= 0613Para calcular la tasa de inhibición:

Tasa de inhibición del inhibidor de bche..Porcentaje(...)=（113 - 0613(...)△ 113 × 100% = 44.924%.

Referencias:

[1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. Una determinación colorimétrica nueva y rápida de la actividad de la acetilcolinesterasa [J]. Farmacología Bioquímica, 1961, 7(2): 88-95.

[2] Noor Atatreh, Sara Al Rawashdah, Sheikha S Al Neyadi. Descubrimiento de nuevos inhibidores de la butirilcolinesterasa mediante cribado virtual basado en la estructura [J]. Revista de inhibición enzimática y química medicinal, 2019, 34(1): 1373-1379.

[3] Li Q, Chen Y, Xing S. et al. Inhibidores altamente potentes y selectivos de la butirilcolinesterasa para la mejora cognitiva y la neuroprotección [J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2021, 64(10): 6856-6876.

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