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¿¿ qué?Shanghai Yansheng industrial co., Ltd.
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Células grasas precursoras de cerdo

Atributos del producto:
Fuentes organizativas |
Especificaciones del producto |
Morfología celular |
Número de artículo |
Tejido adiposo |
5×105 células/T25Botella de cultivo celular |
Fusiforme, poliángulos |
YS-01X7013 |
Perfil de la célula:
La grasa preporcina se separa del tejido adiposo; El tejido adiposo se compone principalmente de un gran número de grupos de células grasas, y las células grasas reunidas en grupos se dividen en folletos por una fina capa de tejido conjuntivo suelto; Las grasas almacenadas, que se descomponen rápidamente en glicerina y ácidos grasos cuando es necesario, se transportan a los tejidos a través de la sangre para su uso. Afectan la sensibilidad a la insulina, los niveles de presión arterial, la función endoteliales, la actividad fibrolítica y la respuesta inflamatoria, y participan en una variedad de procesos fisiopatológicos importantes; El tejido adiposo se ha convertido en un sistema endocrino extremadamente importante desde que solía ser un órgano puramente almacenado en energía. El tejido adiposo contiene dos tipos principales de células en el cuerpo: una es la célula grasa madura que acumula gotas de poliéster en el plasma; La otra son las células precalificas que tienen este potencial, aunque no acumulan gotas de poliéster en el plasma. Las células precalificas tienen forma de fusiforme y tienen la capacidad de dividir y proliferar; Las células grasas maduras son redondas y han perdido la capacidad de dividir y proliferar. Debido a que las células precalificas son una clase de células precursoras específicas con capacidad de proliferación y diferenciación en células grasas, están muy estrechamente relacionadas con la obesidad. Los prealimentados son un tipo de Fibroblasto que absorbe constantemente lípidos durante la evolución y finalmente se convierte en células grasas maduras. Las células precalificas tienen una fuerte resistencia al daño mecánico externo y se espera que se conviertan en un relleno útil para defectos de tejidos blandos.
Condiciones de cultivo de las células primarias:
I. cultivo de células adherentes estáticas (incluido el cultivo de células semiadherentes)
1. las células deben enjuagarse adecuadamente para eliminar la toxicidad del líquido digestivo en la medida de lo posible;
2. la concentración celular debe ser ligeramente mayor al vacunarse, al menos 5 × 108 células / l;
3. los medios de cultivo se pueden cultivar con Eagle (mem Corning 10 - 010 - cvr) o dmem (corning 10 - 013 - cvr);
4. la concentración sérica de ganado fetal es del 10% al 80%.
5. se debe cultivar en una incubadora con 37 ° C y 5% de co2;
6. minimizar las oscilaciones durante los 2 días iniciales para evitar que las células recién adheridas se caigan y floten;
7. cuando la célula se estira básicamente contra la pared y forma gradualmente una red, la célula primaria debe ser reemplazada por líquido;
8. cuando las células suspendidas de la médula ósea o la sangre periférica se cultivan en reposo durante una semana, la suspensión celular debe cambiarse después de la centrifugación a baja velocidad.
II. cultivo de células en suspensión
1. en el cultivo primario, los glóbulos rojos deben eliminarse en la medida de lo posible;
2. el cultivo a corto plazo se puede realizar en un medio de cultivo rpmi1640 que contiene 10% de suero de ternera;
3. la concentración celular puede estar dentro del rango de 5 - 8 × 109 / L y se puede realizar una prueba de botella dividida;
4. en el cultivo a largo plazo, se debe agregar un factor de crecimiento a los linfocitos y una pequeña cantidad de suero de pacientes originales a las células de leucemia para facilitar el crecimiento celular;
5. el cambio de líquido celular generalmente requiere un cambio de líquido de media cantidad cada 3 días;
6. la transmisión celular generalmente se lleva a cabo cuando la proliferación celular se acelera y la densidad celular es alta.
Introducción al método:
Las grasas precursoras de cerdo aisladas por el laboratorio de la compañía se preparan mediante digestión por colagenasa, y el número total de células es de aproximadamente5×10?células/Botella.
Pruebas de calidad:
La grasa precursora de cerdo separada por el laboratorio de la compañía es roja por aceite.ODetección de teñido, con una pureza alcanzable90%Lo anterior y no contieneEl VIH-1,VHB,VHC, micoplasma, bacterias, levadura y hongos, etc.
Información de formación:
El medio de cultivo contieneFBS, aditivos para el crecimiento,penicilina,estreptomicinaesperar
Frecuencia de cambio de líquido por cada2 - 3Cambiar el líquido una vez al día
Características de crecimiento pegadas a la pared
Morfología celular fusiforme, poliángulos
Las características de transmisión se pueden transmitir.3Alrededor de la generación
Líquido digestivo0,25%
Fase gaseosa de las condiciones de cultivo: aire,95%V;CO2,5%

Transmisión celular y criopreservación:
| Pasos de paso celular | Pasos de Criopreservación celular |
| Si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de paso. 1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio. 2. añadir 2 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) en el frasco de cultivo, colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos, y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones, golpear ligeramente el frasco de cultivo y añadir una pequeña cantidad de medio de cultivo para terminar la digestión. 3. presione 6 - 8 ml / botella para complementar el medio de cultivo, revuelva suavemente y exprima, centrifuga durante 4 minutos en condiciones de 1000rpm, abandone el sobrenadante, agregue 1 - 2ml de medio de cultivo y sople bien. 4. dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5. | Cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25; 1. al congelar la célula, después de descartar el medio de cultivo, PBS limpia el Fondo de la botella 1 - 2 veces y agrega 1 ML. después de que la célula se redondea y se cae, agrega 2 ml del medio de cultivo para terminar la digestión, que se puede contar con una placa de recuento de sangre. 2.1000rpm se centrifuga durante 5 minutos para eliminar el desbridamiento. Resuspensión con suero, más Dmso hasta una concentración final del 10%. Después de agregar dmso, mezcle rápidamente y asigne al congelador de acuerdo con la cantidad de cada 1 ml, preste atención al congelador para hacer un buen trabajo de identificación. La compañía congela más de 1x106 células por célula criogénica. 3. coloque el criodepósito en la Caja de enfriamiento del programa, colócalo en el refrigerador de - 80 grados y transfiera al depósito de nitrógeno líquido al menos 2 horas después. Registre la ubicación del congelador para recogerlo la próxima vez. |
Los métodos de cultivo de células primarias generalmente incluyen los siguientes cuatro tipos:
① método de cultivo de bloques de tejido
El cultivo de bloques de tejido es un método de cultivo primario comúnmente utilizado, simple, fácil y con alta tasa de éxito. El método básico es vacunar las pequeñas masas de tejido cortadas en un frasco de cultivo (o placa de petri), que se puede aplicar previamente con una fina capa de colágeno para facilitar que los bloques de tejido se adhieran a la pared del frasco, de modo que las células circundantes puedan crecer hacia afuera a lo largo de la pared del frasco.
② método de cultivo digestivo
③ método de cultivo de células suspendidas
Para las células que crecen en suspensión, como las células leucémicas, los linfocitos, las células de médula ósea, las células cancerosas e inmunes en el líquido torácico y ascite, no es necesario digerir, se puede separar por centrifugación de baja velocidad, cultivar directamente o vacunarse después de la separación por estratificación de linfocitos.
④ cultivo de órganos
El cultivo de órganos se refiere al cultivo directo en condiciones ambientales específicas in vitro sin separación de tejidos después de obtener un órgano o un bloque de tejido de un donante. el cultivo de órganos puede mantener la integridad relativa del tejido orgánico y puede usarse para centrarse en la observación de la conexión, disposición e interacción entre las células, así como la regulación biológica del entorno local.

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