Microesferas de conteo absoluto de flujo

NegociableActualización en05/06

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Descripción general

Las microesferas de conteo absoluto de flujo son ahora ampliamente utilizadas en experimentos de conteo celular y en la investigación de la progresión de la enfermedad, especialmente en el campo de la investigación de células madre.

Detalles del producto

Microesferas de conteo absoluto de flujo

Descripción del producto

descripción

El análisis de conteo celular por Citometría de flujo puede cuantificar rápidamente las características de las células, y las microesferas absolutas de conteo celular ahora se utilizan ampliamente en experimentos de conteo celular y en el estudio de la progresión de la enfermedad, especialmente en el campo de la investigación de células madre. El vial único de este producto contiene partículas fluorescentes teñidas con precisión con tintes fluorescentes, tiene la mejor intensidad de fluorescencia y tiene un amplio espectro de emisión en múltiples canales (fitc, pe, PE - cy5). La superficie de partículas hidrofílicas puede eliminar la producción de dímeros, lo que garantiza la precisión del conteo verificado por el proceso de análisis y la fiabilidad del conteo absoluto del medidor de flujo.
La obtención del recuento absoluto de células se realiza generalmente mediante dos métodos, uno es combinar la concentración de células detectada en el instrumento de análisis celular con los datos de la población celular analizados por el recuento de células por Citometría de flujo (detección multiplataforma) y el otro es agregar el estándar de recuento de microesferas internas a la muestra de células por flujo (detección de una sola plataforma). El método de detección de una sola plataforma es muy simple, evitando diferencias entre laboratorios, por lo que es más preciso y el uso de microesferas de referencia fluorescentes para el recuento absoluto celular es uno de los métodos de recuento absoluto de una sola plataforma de citometro de flujo ampliamente reconocidos por los investigadores clínicos y científicos actuales.

aplicación

Recuento absoluto de linfocitos t, recuento absoluto de células madre hematopoyéticas cd34 +, recuento absoluto de reticulocitos, recuento absoluto de células tumorales circulantes, etc.

Concentración

6.4x107Partículas / ML ± 5%

Modo de empleo

Requisitos de la muestra:
1. tomar muestras de más de 200 ul con Heparina anticoagulante.
2. las muestras deben almacenarse a temperatura ambiente y evitar temblores, y deben usarse dentro de las 24 horas posteriores a la recolección de sangre.
3. después de teñir la muestra, se conserva a 2 - 8 ° C para evitar la luz y se prueba en la máquina dentro de las 24 horas.
4. si la muestra tiene contaminación microbiana, sangre grasa, coagulación y poca vitalidad celular, se debe evitar su uso, a menos que la muestra sea insustituible, por favor marque en el informe de resultados.

Materiales que deben presentarse por sí mismos:
1. hemolítico J para la División de células sanguíneas XI
2. reactivos de anticuerpos de flujo
3. anticoagulación con Heparina para la recolección de sangre Guan
4. el rango de medición es adecuado para pipetas de 20ul, 100ul, 1ml y cabezas de succión desechables.
5. osciladores de vórtice
6. medidor de flujo

Pasos de operación:
1. utilice la tecnología de pipeta inversa para absorber una muestra mezclada con 50 ul, agregue la parte inferior del Gu de conteo absoluto, evite el contacto con la parte inferior del tubo en la parte delantera del pipeta y evite que la sangre toque la parte superior de la pared del tubo.
2. añadir una cierta cantidad de reactivos de anticuerpos de flujo en la parte inferior del tubo de flujo.
3. cubra la tapa del tubo, revuelva suavemente y mezcle durante unos 3 segundos, y evite la luz a temperatura ambiente durante 25 minutos.
4. añadir 450ul de células sanguíneas al tubo para dividir XI con Hemólisis ji, tapar el sombrero del tubo, mezclar suavemente en vórtice durante unos 15 segundos y evitar la luz a temperatura ambiente durante 10 minutos. Libre de lavado, pendiente de inspección.
5. mezcle suavemente el vórtice durante unos 10 segundos y Póngase en la máquina para detectarlo.
A continuación, se muestran los métodos de análisis con muestras de sangre periférica de adultos normales y kits de anticuerpos monoclonales fluorescentes CD3 - fitc / CD8 - PE / cd45 - percp / CD4 - APC (método de medición en flujo).
En primer lugar, se estableció un mapa de dispersión de cd45 / ssc, el Grupo de linfocitos mostró una alta expresión de cd45 y una baja expresión de ssc, rodeada por una puerta irregular, como se muestra en la figura 1:

Figura 1: puerta de linfocitos rodeada en el mapa de dispersión cd45 / SSC

En segundo lugar, se seleccionó para mostrar las células dentro de la puerta de los linfocitos y se estableció el mapa de dispersión CD3 / ssc. Círculo CD3 +, ver figura 2.

Figura 2: los linfocitos CD3 + circulan en el mapa de dispersión CD3 / SSC

Elija mostrar las células dentro de la puerta de los linfocitos y establezca el límite de imagen de dispersión CD3 / cd4. Las células CD3 y CD4 Shuangyang son linfocitos T CD4 +, como se muestra en la figura 3.

Figura 3: el mapa de dispersión CD3 / CD4 establece un límite de cuatro elefantes

Finalmente, seleccione mostrar todas las células, establezca el mapa de dispersión CD3 / CD8 y rodee las microesferas de recuento absoluto, como se muestra en la figura 4.

Figura 4: el mapa de dispersión CD3 / CD8 rodea las microesferas de conteo absoluto

Si no se utiliza el software automático de conteo absoluto, se puede contar manualmente con la siguiente ecuación:
Logaritmo absoluto de los subgrupos linfoides (cells / ul) = (número de células de los subgrupos linfoides en la región x valor marcado de las microesferas) / (número absoluto de microesferas en la región x volumen de muestra)

Método de almacenamiento / conservación

Conservar a 2 - 30 ° C y no congelar, válido por 5 años.

Indicadores técnicos

componente	Microesferas de poliestireno teñidas de fluorescencia múltiple
Tamaño de las microesferas	5 micras
color	Fluorescencia verde (488 / 525 nm)
	Fluorescencia Roja (535 / 575 nm)
	Fluorescencia de infrarrojo cercano (635 / 660 nm)
Concentración	6,4 × 107Partículas / ML ± 5%
Densidad	1,05 g/cm³
Todos una vez	CV del 3%
Aditivos	Dispersante / tensoactivo 0,05% tween - 20, conservante de 2 mm

Precauciones

1. no congele.
2. el efecto de choque ultrasónico 10s antes de su uso zuijia.

Áreas de investigación
Áreas de investigación	Descubrimiento de drogasFármaco de molécula pequeñaDescubrimiento de compuestos de plomo

Microesferas de conteo absoluto de flujoConsejo cálido: este producto solo se utiliza para experimentos de investigación científica y no admite investigación clínica.

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