pU6-Ets2 (ratón)-sgARN2-Cas9-EGFP

Precauciones: antes de la transformación, busque con precisión el nombre antibiótico correspondiente al plásmido, la concentración de uso de antibióticos, el nombre sensorial y la temperatura de cultivo.

1Después de recibir el polvo seco del plasmídeo, por favor.5000rpmCentrifugadora1 minuto, y luego unirse20 μl ~ 50 μlAgua estéril opH 8.0de1 * TETampón para disolver el plasmídeo, colocado a temperatura ambiente1 minutoV;

2, de-80℃Retire el estado sensorial correspondiente del refrigerador, Póngalo en una caja de hielo para descongelarlo y marcarlo bien;

3、 取2 μlSe añade el plasmídeo100 μlEn estado sensorial, baño de hielo30 minutosV;

4,42℃Excitación térmicaaños 90, baño de hielo de nuevo2 minutosV;

5, unirse900 μlSin resistenciaLBMedio de cultivo líquido,180 rpmCultivo de choque45 minutosV;

6,6000 rpmCentrifugadora5 minutos, solo se queda100ulShangqing se mezcla y las bacterias se precipitan;

7. después de mezclar, agregue el líquido bacteriano a la resistencia correspondiente.LBEn la placa plana, vierte una cantidad adecuada de perlas de vidrio y aplica el líquido bien;

8Cultivo positivo de tabletas1 hora, y luego invertir el cultivo12h~16hV;

9, recoger colonias monoclonales a la resistencia correspondienteLBEn medio líquido, cultivo de choque12h~16hExtraer el plasmídeo de acuerdo con las necesidades del experimento