Kit de identificación PCR de colonias de vectores T universales, portador de principios T4

Kit universal de identificación PCR de colonias de vectores t

Kit de identificación PCR de colonias de vectores T universales, portador de principios T4

Número de catálogo:42015

Composición, almacenamiento y estabilidad del kit:

Almacenamiento:-20 ℃ 保存。

Introducción del producto:

ColoniasPCRLa identificación esTDespués de la conexión de clonación del vector, es un método conveniente y rápido para identificar si hay un clon positivo (incluido el fragmento de inserción) zui. Pero las colonias que se pueden ver en el mercadoPCRLos kits de identificación utilizanT3, T7oSP6Igual especificidadTPrimer portador, solo para algún tipo de particularTIdentificación de clones positivos de conexión vectorial. Si se usa de manera diferenteTEl portador necesita comprar una variedad de kits de identificación al mismo tiempo, lo que aumenta en gran medida el costo de uso. La compañía adopta GMTUniversal desarrollado por el primer portadorTColonias vectorialesPCRLos kits de identificación, con solo la compra de un kit, están disponibles para todos los comunes en el mercado.TPortador(IncluyepGEM,pUC,pBluescriptserie(...)Identificación de clones positivos conectados. Además, se adoptaT3, T7oSP6Colonias que hacen primerosPCRLa distancia entre los primeros del kit de identificación y el sitio de inserción es muy corta, por lo que en la identificación100bpAl insertar fragmentos izquierdo y derecho o más pequeños, las bandas de Dímero de primer del clon negativo y las bandas de amplificación del clon positivo son cercanas y no se pueden distinguir. A menudo, las bandas de los Dimers de primer se consideran bandas de amplificación positiva, lo que resulta en falsos positivos. Por el contrario, causa falsos negativos. Este Kit es universalTEl primer portador está al menos a una distancia sin insertar el fragmento150bpLo anterior, junto con la longitud del fragmento insertado, puede distinguir claramente si la banda amplificada por el fragmento insertado o la banda amplificada por el Dímero de primer. Evitar falsos positivos o falsos negativos mejora en gran medida la precisión.Un tubo portátil desarrollado por la compañíaPCR MasterMixEl sistema de premezcla no requiere que agregue varios ingredientes uno por uno, la adición directa requiere la detección de colonias individuales, después de1Unas horasPCRLos resultados de la identificación de colonias recombinantes se pueden obtener mediante pruebas de reacción y gel.

Fragmentos amplificados esperados:

Precauciones:

1. Al identificar las colonias recombinantes, antes de seleccionar una sola colonia, se debe marcar para facilitar la identificación y su uso.

2. Al recoger colonias, se debe elegir una sola colonia y no recoger demasiados hongos para no afectar.PCRResultados.

3. configuraciónPCRAl programar, determine el tiempo de extensión en función del tamaño del clip insertado, si el tamaño del clip insertado es1 KbAbajo, tiempo de extensión30 - 45Segundos, si el clip es más largo, se puede aumentar el tiempo de extensión en esta proporción.

Pasos de operación (en25mlPor ejemplo, el sistema, los clientes también pueden adoptar20mlSistema:

{C}1. Emparejar con un primer de acuerdo con el siguiente sistema1 x Taq MasterMixLíquido de reacción.

2. Después de numerar las colonias en la placa cultivada durante la noche, utilice una cabeza de pistola esterilizada para recoger una parte de las colonias individuales y agregarlas al líquido de reacción anterior, sople y mezcle bien para que las colonias se dispersen completamente en el líquido de reacción.

Se puede establecer un tubo adicional de control negativo sin colonias para facilitar el análisis de los resultados experimentales.

3. PonerPCREl tubo se coloca en el circulador térmico para comenzar la reacción de acuerdo con las siguientes condiciones, las condiciones recomendadas son las siguientes:

94℃10 minutos

94℃30 segundos

55℃30 sec 30-33 ciclos

72℃0,5-1 minutos

72℃5 minutos

Nota: el tiempo de extensión se ajusta de acuerdo con el tamaño del clip insertado. El tiempo de predisposición se extiende a10Minutos, principalmente para romper colonias y liberarADNPlantilla.

Después de la reacción, tome5 - 10mlPrueba de PCR de muestra directa.

Nota: si las bacterias son difíciles de romper o las impurezas son demasiado falsas y negativas, pruebe el siguiente método para romper y liberarADNDespués de eso.

1. Recoger colonias para unirse 50ml díaAgua (o10ml díaAgua), sacudida.

2. 99Grados,10Minutos para inactivar la enzima en el líquido bacteriano y liberarlaADN.

3. 12000rpmCentrifugadora1Minutos para eliminar fragmentos celulares.

4. Recoger la limpieza superiorPCR,25ml PCRExtracción del sistema5mlShangqing (inicio50ml díaAgua), o1mlShangqing (inicio10ml díaAgua) para hacer encofrados.

Kit de identificación PCR de colonias de vectores T universales, portador de principios T4