Trzol (reactivo de extracción de ARN total) (rojo)

¡¡ los productos de la compañía son solo para investigación científica y no se pueden utilizar para diagnóstico clínico!

Introducción del producto: el reactivo trzol es un reactivo que extrae el ARN total directamente de las células o tejidos. Mantiene la integridad del ARN al romper y disolver las células. Después de agregar cloroformo, la muestra se centrifuga y se divide en una capa de muestra de agua y una capa orgánica. El ARN está presente en la capa de muestra de agua. Después de recoger la capa de muestra de agua anterior, el ARN se puede recuperar a través de la precipitación de alcohol isopropílico.

Ya sean tejidos humanos, animales, vegetales o bacterianos, este método tiene un mejor efecto de aislamiento en pequeñas y grandes cantidades de tejidos y células. La simplicidad operativa del reactivo trzol permite procesar varias muestras al mismo tiempo. Todas las operaciones se pueden completar en una hora. El ARN total extraído por trzol es capaz de evitar la contaminación del ADN y las proteínas. Por lo tanto, puede hacer análisis de impresión de arn, hibridación de manchas, selección Poly (a) +, transcripción in vitro, análisis de protección enzimática de ARN y clonación molecular.

El reactivo trzol puede promover la precipitación de una variedad de ARN de diferentes especies, géneros y diferentes tamaños moleculares. Por ejemplo, el ARN extraído del hígado de la rata, por medio de la página de gel de agarosa y teñido con bromuro de etidio, mostró muchas bandas de alto peso molecular discontinuas entre 7 y 15 kb (componentes de arnm y hnrna), dos ribosomas dominantes a 5 kb (28s) y a 2 kb (18s), y ARN de bajo peso molecular mediado entre 0,1 y 0,3 kb (arnt, 5s). Cuando el ARN extraído se diluye con te, su relación a 260 / a 280 es ≥ 1,8.

Almacenamiento del producto: trzol se puede conservar de manera estable a temperatura ambiente durante 12 meses. Sin embargo, para lograr los mejores resultados, recomendamos conservarlos en un ambiente de 2 - 8 ° c.

¿¿ qué reactivos y equipos se necesitan para la respuesta pcr?

Reactivos:
ADN de plantilla: la respuesta PCR requiere ADN de plantilla, como la extracción de ADN de células, tejidos, sangre, etc.; Primer: dos primeros de la reacción pcr, que se emparejan con los dos extremos del ADN de la plantilla para ampliar las áreas específicas necesarias, los primeros también se pueden sintetizar en los primeros utilizados en el proceso de clonación de Ta y así sucesivamente; Dntps: en la respuesta PCR se necesitan cuatro dntps, incluidos el ácido desoxiadenoadenilato (dptp), el ácido desoxitimidina (dctp), el ácido desoxiguanídico (dgtp), el ácido Desoxicitidina (ddtp), para procesos biológicos como la División celular y la síntesis de adn, y la extensión y expansión de la cadena de ADN de la plantilla para la amplificación pcr; Polimerasa de ADN taq: la polimerasa necesaria para la reacción pcr, generalmente utilizando la polimerasa taq, y algunos otros tipos de polimerasa como pfu, phusion, etc., se utilizan para expandir la cadena de adn; Solución de tampón pcr: tiene un efecto amortiguador sobre la reacción pcr, ajusta el pH de la reacción, el tiosulfato de hidrógeno sds, compuestos orgánicos de moléculas pequeñas como el formaldehído, puede mejorar la especificidad de la reacción pcr, mejorando así la eficiencia de la reacción; Sistema de enzima: la amplificación PCR a menudo implica pasos experimentales como recombinación, construcción y secuenciación, y a menudo requiere operaciones de enzima. Mark: un estándar de peso molecular utilizado para distinguir el tamaño de un fragmento de adn. Kit de purificación de adn: para purificar productos de reacción pcr;
Equipo:
Instrumento pcr: se utiliza para controlar la temperatura de reacción y garantizar el control estricto de los diferentes enlaces de temperatura durante la reacción pcr; Tanque de electrolisis: para la separación de productos de amplificación pcr; Extractor de ácido nucleico: extracción totalmente automática de ácido nucleico de muestras de tejido. Estos reactivos y equipos están en la tecnología de biología molecular pcr, y solo sobre una base ordenada y completa se puede realizar una reacción PCR y obtener resultados precisos.

Experimentos básicos relacionados con la pcr:

La reacción en cadena de la polimerasa, cuyos pasos básicos son la reacción pcr, consiste en entre 20 y 35 ciclos, cada uno de los cuales consta de los siguientes tres pasos:

I,Desnaturalización:

El ADN de doble cadena se separa a altas temperaturas (93 - 98 ° c). Las altas temperaturas rompen el enlace de hidrógeno que une dos cadenas de adn. Antes del primer ciclo, por lo general se calienta durante más tiempo para garantizar la separación de la plantilla y el primer, y solo existe en forma de cadena única. El tiempo de paso es de 1 - 2 minutos, y luego el PCR controla la temperatura para entrar en la etapa de circulación.

2. recocido o unión, renacer:

Después de la separación de la doble cadena de adn, la temperatura se reduce para que el primer pueda unirse al ADN de una sola cadena. La temperatura en esta etapa suele estar 5 ° C por debajo del punto de fusión del primer. La temperatura de recocido incorrecta puede hacer que el primer no se adhiera a la plantilla o se adhiera erróneamente. El tiempo del paso es de 1 - 2 minutos.

3. extensión:

La polimerasa de ADN comienza a sintetizar cadenas complementarias a lo largo de las cadenas de ADN a partir de los primeros Unidos al enfriamiento. La temperatura en esta etapa depende de la polimerasa de adn. El tiempo de paso depende de la polimerasa y de la longitud del fragmento de ADN que se necesita sintetizar. El Taq tradicional estima que la síntesis de 1000bp / min, el tbr más nuevo (de la bacteria termofílica Thermus brockianus) es de unos 40 segundos, y la polimerasa de fusión producida por empresas comerciales tarda solo unos 10 - 15 segundos.

Optimización de las condiciones de reacción pcr:

1. temperatura y tiempo de desnaturalización:

Garantizar la resolución de la cadena de ADN de la plantilla es la clave para garantizar el éxito de toda la amplificación pcr. Calentar de 90 a 95 ° c, 30 a 60 s, no importa cuán complejas sean las moléculas de adn, pueden transformarse en una sola cadena. Las temperaturas excesivas o la duración excesiva de las altas temperaturas pueden causar daños a la actividad de la enzima Taq y a las moléculas dntp.

2. temperatura y tiempo de renacer:

La especificidad de la amplificación PCR depende de la Unión del primer a la plantilla durante el proceso de renaturación. Cuanto mayor sea la temperatura de renaturación, mayor será la especificidad del producto. Cuanto menor sea la temperatura de renaturación, menor será la especificidad del producto. Debe establecerse específicamente de acuerdo con el valor Tm del primer.

3. temperatura y tiempo de extensión:

Por lo general, se encuentra entre 70 y 75 ° C de la temperatura óptima de Acción de la enzima taq. Cuando el primer es inferior a 16 nucleótidos, la temperatura de extensión demasiado alta no es propicia para la Unión del primer con la plantilla y puede calentarse lentamente a 70 a 75 ° c. el tiempo de reacción de extensión puede depender de la longitud del fragmento a amplificar, menos de 1 kb, 1 min es suficiente; Más de 1 kb requiere un tiempo de extensión más largo. La enzima Taq puede aumentar el tiempo en función de 1kb / min. Aquí hay que tener en cuenta que la extensión excesiva puede producir amplificación no específica. Por lo tanto, es necesario establecer el tiempo de extensión adecuado.

4. número de ciclos:

Después de la selección de otros parámetros, el número de ciclos PCR depende principalmente de la concentración del ADN de la plantilla. En teoría, después de 20 a 25 ciclos, la acumulación de productos PCR puede alcanzar el valor máximo. en la práctica, debido a que el rendimiento de cada paso de reacción no puede alcanzar el 100%, no importa cuál sea la concentración de la plantilla, de 20 a 30 ciclos es un número razonable de ciclos. Cuanto mayor sea el número de ciclos, mayor será la amplificación no específica.

Productos que la compañía está vendiendo:

TRzol(total ARN Reactivos de extracción)( rojo (...)	Pandemic 2009kit de detección de ácido nucleico del gen ha del virus de la gripe H1N1	Kit de prueba de contenido de Coenzima I nad (h) (método colorimétrico)
TRzol(total ARN Reactivos de extracción)( incoloro (...)	Kit de detección de ácido nucleico del gen ha del subtipo h3n2 del virus de la gripe estacional	NADCinasasNADK) Caja de prueba (método colorimétrico)
TRzol LS(muestra de líquido ARN Reactivos de extracción)	Kit de detección de ácido nucleico del gen ha del virus del subtipo h7n9	Kit de prueba de Lactato deshidrogenasa (ldh) (método colorimétrico)
ARNpuro Total ultrapuro ARN Kit de Extracción rápida (DNase I)	Kit de detección de ácido nucleico del gen na del virus del subtipo h7n9	Caja de prueba de Malato deshidrogenasa nad (nadmdh) (método colorimétrico)
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EASYspin organización /. Células ARN Kit de Extracción rápida (DNase I)	Kit de detección de ácido nucleico del virus de la gripe B Yamagata	Complejo de la cadena respiratoria mitocondrial I / Nadh Coenzima Q reductasa kit de prueba (método colorimétrico)
EASYspin planta ARN Kit de Extracción rápida (DNase I)	Kit de detección de ácido nucleico del virus de la gripe B Victoria	Caja de prueba de Nadh Oxigenasa (nox) (método colorimétrico)
PLANTaid planta ARN Promotor	Kit de detección de ácido nucleico de la CEPA mutante h7n9 del virus (hpai - h7)	Caja de prueba de ácido cítrico sintasa (cs) (método colorimétrico)
Genoma viral ADN / ARN Kit de Extracción rápida	Kit de detección de ácido nucleico del gen ha del subtipo H1N1 del virus de la gripe estacional	Caja de prueba de contenido de etanol (método colorimétrico)
ARN limpio ARN Kit de purificación de limpieza	Kit de detección de ácido nucleico del virus de la gripe C	Etanol deshidrogenasaADH) Caja de prueba (método colorimétrico)
Fixador de ARN Sin nitrógeno líquido ARN Solución de almacenamiento de muestras	Kit de detección de ácido nucleico del virus de la gripe aviar y porcina eurasiática (ea - h1n1)	Caja de prueba de formaldehído deshidrogenasa (fdh) (método colorimétrico)
Eso es seguro. eficiente RNase Inactivador	Kit de detección de ácido nucleico del virus de la gripe A / virus de la gripe B	Kit de prueba de Acetaldehído deshidrogenasa (aldh) (método colorimétrico)
ARN largo ARN Solución de conservación a largo plazo	Kit de detección de ácido nucleico del virus del subtipo h7n9 / contiene etiqueta interna	Coenzima IINADP(H)Caja de prueba de contenido (método colorimétrico)
RNase Fuera Potente listo para usar RNase Inactivador	Kit de detección de ácido nucleico del subtipo h3n2 del virus de la gripe estacional	Kit de prueba de Fosfatasa nadp (nadpasa) (método colorimétrico)