Medio de cultivo especial para células endoteliales microvasculares grasas primarias de conejo

Pasos del experimento celular:

I. reanimación celular

1. coloque la pipeta de 10 ml, la pistola de pipeta, la cabeza de la pistola de 1 ml, la tubería centrífuga de 50 ml, la botella de cultivo t25, la lámpara de alcohol, el tanque de residuos líquidos y otros artículos en la Mesa de trabajo súper limpia, y ventile la lámpara ultravioleta durante 30 minutos después de 30 minutos de irradiación;

2. precalentar el medio de cultivo;

3. desinfecte con 75% de alcohol y póngalo en la Mesa de trabajo súper limpia;

4. extraer las células congeladas del tanque de nitrógeno líquido;

5. coloque los guantes desechables en una olla de baño de agua a 37 ° C y agite rápidamente para derretirlos;

6. desinfecte con 75% de alcohol y póngalo en la Mesa de trabajo súper limpia;

7. absorber 9 ml de medio de cultivo en un tubo centrífuga de 50 ml;

8. absorber la suspensión celular descongelada en un tubo centrífuga con una cabeza de pistola de 1 ml;

9.1000r/min, Centrifugación durante 5 min;

10. desinfecte con 75% de alcohol y póngalo en la Mesa de trabajo súper limpia;

11. aspirar y descartar el líquido sobrenadante;

12. absorber 1 ml de células de suspensión pesada del medio de cultivo, transferir la suspensión celular al frasco de cultivo, complementar el medio de cultivo adecuado, sacudir suavemente el frasco de cultivo para que las células se distribuyan uniformemente y marcar bien;

13. observar la densidad celular y el Estado de la reanimación bajo un microscopio;

14. vuelva a poner la célula en una incubadora de dióxido de carbono para cultivarla en reposo.

Atributos del producto:

El medio de cultivo de células endoteliales microvasculares de grasa primaria de conejo fue cuidadosamente optimizado por el equipo. después de pruebas a largo plazo, este producto puede mantener un excelente estado de crecimiento de las células endoteliales microvasculares de grasa primaria de conejo.

Este producto ya contiene varios ingredientes necesarios para el crecimiento de las células endoteliales microvasculares de grasa primaria de conejo, sin agregar ningún ingrediente, y se puede utilizar directamente en el cultivo de células endoteliales microvasculares de grasa primaria de conejo.

Precauciones:

Solo para investigación científica.

Algunos de los componentes del sistema de cultivo son sustancias nocivas para la salud humana. no toque el interior del recipiente con el líquido del sistema de cultivo y el líquido residual del sistema de cultivo con la piel expuesta; La concentración y la nocividad de esta parte de las sustancias nocivas son bajas, y en caso de contacto, se puede lavar inmediatamente con agua del grifo.

Pasos de cultivo celular:

- reanimación celular:

Extraer las células congeladas del tanque de nitrógeno líquido y descongelarlas rápidamente en un baño de agua a 37 ° c.

Después del deshielo, las células se transfieren a una placa de Petri que contiene un medio fresco y se agitan suavemente para que las células se distribuyan uniformemente.

Cultivar en una incubadora de 37 ° C y 5% de co2.

‌ cambio de líquido celular:

Retire o retire el viejo medio de cultivo dentro de la placa de petri.

Agregue el amortiguador PBS y enjuague suavemente la célula para eliminar los fragmentos suspendidos en la superficie de la célula, repitiendo varias veces.

Añadir un nuevo medio de cultivo.

‌ transmisión celular:

Cuando la célula crece entre el 80% y el 90%, se transmite.

Retire o retire el medio de cultivo antiguo de la botella y agregue el amortiguador PBS para enjuagar.

Agregue el líquido digestivo y agite suavemente para que el líquido digestivo fluya por todas las superficies celulares.

Coloque el frasco de cultivo en una incubadora a 37 ° C y déjelo reposar durante unos minutos para observar los cambios celulares. Cuando el espacio celular aumenta, se añade un medio de cultivo que contiene suero para terminar la digestión.

Soplar la célula la convierte en una suspensión que se transfiere a un tubo centrífuga para centrifugarse.

Abandone el sobrenadante y agregue una cantidad adecuada de líquido de cultivo celular para suspender las células.

Envuélvelo proporcionalmente en una nueva placa de Petri y agregue un medio fresco.

Marcar y cultivar en una incubadora de 37 ° C y 5% de co2.

‌ Criopreservación celular:

Se seleccionan varias células en crecimiento para la criopreservación.

Las células se transfieren a un tubo centrífuga para centrifugarse y se abandona el sobrenadante.

Añadir una cantidad adecuada de Criopreservación (como 90% de medio de cultivo + 10% de dmso) y soplar suavemente las células de suspensión pesada.

Transfiera la célula al tubo de criopreservación, marque y póngalo en la Caja de enfriamiento del programa, y luego Póngalo en el refrigerador - 80 ℃ para congelarlo. Después de unas horas o durante la noche, se transfiere al tanque de nitrógeno líquido para su conservación.

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