Servicio experimental cuantitativo de marcadores metabólicos silac

Servicio experimental cuantitativo de marcadores metabólicos silac

Introducción a la tecnología experimental: el principio básico de Sil AC es reemplazar los aminoácidos correspondientes en el medio de cultivo celular con aminoácidos esenciales marcados por isótopos naturales (ligeros) o isótopos estables (pesados), respectivamente. después de que la célula pasa por 5 - 6 ciclos de duplicación, los aminoácidos marcados por isótopos estables * se mezclan en proteínas recién sintetizadas de la célula para reemplazar los aminoácidos originales. Las proteínas lisas de las diferentes células marcadas se mezclan en proporciones como el número de células o la cantidad de proteínas, se separan y purifican para la identificación por espectrometría de masas, y se cuantifican relativamente de acuerdo con la comparación de áreas de dos segmentos de péptidos isotópicos en la espectrometría de masas de primer orden. Pertenece al método de etiquetado metabólico in vivo.

Proceso de operación experimental:

1. extracción de proteínas y preparación de muestras

2. prueba de eficiencia de marcado

3. Mesa mixta de muestras

4. clasificación SDS - Page

5. enzima

6. identificación por espectrometría de masas

7. análisis de software

8. resultados cualitativos y cuantitativos del Proteoma

9. minería de datos y análisis estadístico de la bioinformática

Precauciones del experimento:

El cliente ofrece:

1. extractos de proteínas: La concentración es superior a 1 μg / ul, y la cantidad total de proteínas es superior a 300 μg.

2. células: no menos de 2x106 células se toman a través del recuento celular en el tubo ep, se añaden 0,5 ml de solución salina o protector de proteínas, se mezclan y se conservan en el refrigerador (- 80 ° C para evitar la congelación y descongelación repetidas).

Criterios de entrega:

1. identificación de proteínas y resultados del análisis cuantitativo de Sil ac;

2. el cliente se refiere a DingMapa de picos de espectrometría de masas correspondientes a proteínas;

3. pasos experimentales completos del experimento SIL ac, instrumentos de uso, parámetros de recuperación de software, etc.

Otros:

1. silac es una tecnología de etiquetado in vivo. los aminoácidos marcados por isótopos estables tienen básicamente las mismas propiedades químicas que los aminoácidos naturales. las células marcadas y las células no marcadas tienen pocas diferencias en el comportamiento biológico, y la eficiencia de etiquetado puede alcanzar el 100%.

2. se utiliza la espectrometría de masas para cuantificar, los resultados cuantitativos son precisos, la variación del lote es pequeña y la repetibilidad es buena.

3. los marcadores metabólicos in vivo se combinan con SDS - page o técnicas de separación cromatográfica para ser compatibles con proteínas hidrofóbicas y proteínas metaalcalinas, sin restricciones por las propiedades de las proteínas.

4. después de mezclar varias muestras, se realiza la separación, la enzima y la identificación simultáneas. los experimentos posteriores tienen el mismo impacto en las muestras, lo que reduce el impacto de las operaciones experimentales y los instrumentos.

5. debido a que esta tecnología pertenece al etiquetado in vivo, el efecto de etiquetado es estable y su eficiencia de etiquetado no se ve afectada por el lisado, que no solo es adecuado para el análisis de proteínas de células enteras, sino también para la identificación y cuantificación de proteínas de membrana.

6. en comparación con el etiquetado químico, la necesidad de proteína del método Sil AC se reduce significativamente, y generalmente solo se necesitan decenas de microgramos de proteína por muestra.

7. marcas vivas, más cercanas al estado real de la muestra.

8. solo para células cultivadas in vivo, para muestras de tejido comúnmente utilizadas en la investigación biomédica, muestras de fluidos corporales, etc., no se pueden analizar, y el costo de etiquetado para modelos animales es demasiado grande para lograrlo. En comparación con la tecnología de etiquetado in vitro, Sil AC pertenece al etiquetado in vivo y tiene las siguientes ventajas técnicas.

1. alto rendimiento, que puede identificar y cuantificar cientos a miles de proteínas al mismo tiempo;

2. precisión cuantitativaReducir las diferencias experimentales causadas por las diferentes preparaciones de muestras;

3. una amplia gama de cuantificación lineal;

4. mayor sensibilidad y menor demanda de proteínas;

5. el marcado utiliza la tecnología de marcado in vivo, que está más cerca del estado real de la muestra.

Contenido del servicio técnico silac

1. etiquetado isotópico celular;

3. separación SDS - page;

4. separación de fase líquida y análisis de espectrometría de masas después de la extracción de tripsina;

5. recuperación de bases de datos y análisis cuantitativo de proteínas;

6. análisis bioinformático de proteínas diferenciadas;

7. presentación del informe experimental.

Contenido del informe del servicio experimental

1. identificación de la proteína y resultados del análisis cuantitativo de Sil ac;

2. el cliente se refiere a DingMapa de picos de espectrometría de masas correspondientes a proteínas;

3. pasos experimentales completos del experimento SIL ac, instrumentos de uso, parámetros de recuperación de software, etc.

Ventajas de los servicios técnicos

1. alta sensibilidad, bajo límite de detección y detección de proteínas de baja abundancia;

2. tiene una fuerte capacidad de separación y un amplio alcance de análisis. ititraq puede aislar e identificar cualquier tipo de proteína, incluidas proteínas de alto peso molecular, proteínas ácidas y alcalinas, proteínas de membrana y proteínas solubles;

3. alto rendimiento: análisis simultáneo de ocho muestras, lo que mejora el flujo experimental y puede analizar proteínas en varios momentos o diferentes tratamientos al mismo tiempo;

4. los resultados son confiables: los resultados del análisis cualitativo y cuantitativo son más confiables;

5. alto grado de automatización: fase líquida y espectrometría de masas, operación automatizada, análisis rápido y buen efecto de separación.

Servicios experimentales: