Investigación científica del kit de detección de dopamina (da) Elisa del pez cebra

Investigación científica del kit de detección de dopamina (da) Elisa del pez cebraResumen de las instrucciones de operación estándar para referencia. Los pasos específicos deben basarse en las instrucciones reales del kit.

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I. preparación previa al experimento

1. Reactivos y materiales

   • Kits (incluidos estándares, anticuerpos de detección, placas estándar enzimáticas, sustratos A / b, líquidos de terminación, líquidos de lavado, películas de sellado, etc.).
   • Muestras (suero, plasma, homogeneizado de tejido, etc.).
   • Incubadora de 37 ° c, centrífuga, pipeta, lavadora de placas (o lavado manual de placas), medidor de estándar enzimático (longitud de onda de 450 nm).

2. Procesamiento de muestras

   • Suero / plasma: separación centrífuga (3000 × g, 10 minutos), extracción de líquido claro.
   • Homogeneizado de tejido: centrifugado después del homogeneizado (5000 × g, 10 minutos), despejado.
   • Las muestras deben evitar la congelación y el deshielo repetidos, la conservación a corto plazo a 4 ° c o la conservación a largo plazo a - 80 ° c.

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II. pasos operativos

1. preparación de productos estándar

• Vuelva a disolver el polvo liofilizado estándar con una dilución y diluya de acuerdo con el gradiente de las instrucciones.

2. añadir muestras

• Añadir una muestra o estándar de 100 μl por agujero y establecer un agujero en blanco.
• Cubrir la película de sellado y incubar a 37 ° C durante 90 minutos.

3. lavado

• Deseche el líquido del agujero, agregue 350 μl de detergente a cada agujero, deje reposar durante 30 segundos y deseche, repita 3 veces. Secar el líquido residual.

4. detección de la incubación de anticuerpos

• Se agregó 100 μl de líquido de trabajo de anticuerpos biotinizados a cada agujero y se incubaron a 37 ° C durante 60 minutos.
• Lavar 3 veces (salto simultáneo 3).

5. reacción de color

• Se agregó un complejo enzimático de 100 μl (marcado por hrp) por agujero y se eclosionó a 37 ° C para evitar la luz durante 30 minutos.
• Lavar 5 veces (chedi elimina el detergente).

6. terminar la reacción y la lectura

• Añadir 50 μl de líquido de terminación por agujero y medir el valor de od a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático en 15 minutos.

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III. cálculo de los resultados

1. Dibuja la curva estándar
   • Tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical, se ajusta la curva estándar (modelo logístico de cuatro parámetros comúnmente utilizado).
2. Cálculo de la concentración de la muestra
   • La concentración de lpa se calcula de acuerdo con la fórmula de la curva estándar de sustitución del valor od de la muestra.

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IV. precauciones

1. Evite estrictamente la contaminación cruzada y cambie la cabeza de la pistola al agregar muestras.
2. Los pasos de lavado requieren Chedi para evitar que los residuos afecten la señal.
3. Los estándares y reactivos deben recuperarse a temperatura ambiente antes de su uso.
4. El líquido de terminación es corrosivo y se necesitan guantes para operar.
5. Si el valor de od excede el rango de la curva estándar, es necesario ajustar la proporción de dilución de la muestra.

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