Operación del kit de prueba Elisa de elastasa de pez cebra

Operación del kit de prueba Elisa de elastasa de pez cebraEl método de preprocesamiento de la muestra y las precauciones después de recibir el kit son para referencia:

I. métodos de preprocesamiento de muestras

Los diferentes tipos de muestras se procesan de diferentes maneras y deben seguirse estrictamente las instrucciones del kit. Los siguientes son los puntos clave del tratamiento de los tipos de muestras comunes:

1. suero / plasma

• Recolección: se utiliza un tubo anticoagulante de EDTA o Heparina sin indicadores de detección para recoger la sangre y evitar la hemólisis.
• Centrifugación: 2000 - 3000 × g, centrifugación a 4 ° C durante 10 - 15 minutos, separación de suero / plasma.
• Conservación: después del embalaje, se congela a - 80 ° c (para evitar la congelación y descongelación repetidas), y se puede conservar a - 20 ° C a corto plazo (debe detectarse lo antes posible).

2. homogeneización de tejidos

• Material: tejido fresco, enjuagar con solución salina normal y secar el agua.
• Homogeneizado: por peso (g): volumen (ml) = 1: 9 - 10 añadir PBS preconfriados o lisado (incluido el inhibidor de la proteasa), homogeneizar y Dejar reposar sobre hielo durante 30 minutos.
• Centrifugación: 12000 × g, centrifugación a 4 ° C durante 10 - 15 minutos, despejado.
• Conservación: mismo suero / plasma.

3. lisado celular

• Recoger células: lavar las células 2 - 3 veces con PBS y descartar el sobrenadante por centrifugación.
• Craqueo: añadir el lisado Ripa (incluido el inhibidor de la proteasa), romper por ultrasonido o congelar y descongelar repetidamente el craqueo.
• Centrifugación: 12000 × g, centrifugación a 4 ° C durante 20 minutos, despejado.
• Conservación: igual que antes.

4. heces / otras muestras biológicas

• Pretratamiento: las heces deben homogeneizarse y agregar un disolvente (como la mezcla de cloroformo y metanol) para extraer lípidos, y después de la centrifugación, tomar la fase orgánica para secar y luego volver a disolverse.
• Conservación: evite la oxidación y se recomienda conservarla a - 80 ° C después del embalaje.

Precauciones clave:

• Evitar la contaminación lipídica (como la necesidad de Chedi para eliminar los residuos de disolvente al usar cloroformo para la extracción).
• Las muestras pueden contener proteínas de unión endógenas y es necesario garantizar una lisis adecuada.
• Evite la congelación y descongelación repetidas (se recomienda empacar y conservar).

II. tratamiento después de recibir el kit

1. Comprobar la integridad del kit:

   • Confirmar que los reactivos, los productos de calibración, los productos de control de calidad, las instrucciones, etc. están completos.
   • Compruebe si el frasco de reactivos está bien sellado y no hay fugas ni estratificación.

2. Condiciones de conservación:

   • Kit sin abrir: conservar según las instrucciones (generalmente refrigerado a 2 - 8 ° c).
   • Reactivos abiertos: el uso a corto plazo se puede almacenar a 2 - 8 ° C y se necesita conservar a - 20 ° C durante mucho tiempo (por ejemplo, las tiras estándar enzimáticas deben sellarse en bolsas de papel de aluminio para evitar la luz).

3. Embalaje y uso:

   • Se recomienda congelar los productos de calibración y control de calidad después del embalaje para evitar la congelación y descongelación repetidas.
   • Antes de usar el reactivo, es necesario volver a la temperatura ambiente (15 - 30 minutos) para evitar que el cambio repentino de temperatura afecte la reacción.

4. Calibración y control de calidad:

   • Al hacer la curva estándar, es necesario diluir el calibrador estrictamente de acuerdo con el gradiente de concentración.
   • Los resultados de los productos de control de calidad deben estar dentro del rango permitido, de lo contrario es necesario investigar la operación o el problema del reactivo.

III. problemas y soluciones comunes

1. Después del tratamiento de la muestra, el valor de od es bajo o alto:

   • Compruebe si la muestra se degrada (por ejemplo, si se conserva incorrectamente y causa oxidación).
   • Confirme si el múltiplo de dilución de la muestra es adecuado (debe ajustarse más allá del rango lineal).

2. Color anormal (como Fondo alto, color desigual):

   • Compruebe si la adición de líquido de terminación es excesiva o insuficiente.
   • Confirme si el tiempo y la temperatura de incubación cumplen con los requisitos.

3. La curva de calibración no es ideal:

   • Comprobar si los productos estándar son disueltos correctamente y si hay contaminación.
   • Confirme la configuración de la longitud de onda del medidor de enzima (generalmente 450 nm ± 10 nm).

4. Falla del reactivo:

   • Si el kit no se conserva adecuadamente (como congelación y deshielo repetidos o altas temperaturas), puede causar que el kit falle, se recomienda contactar con el proveedor para reemplazarlo.

IV. otras recomendaciones

• Los experimentos previos al experimento optimizan los pasos de procesamiento de la muestra (por ejemplo, los diferentes tejidos pueden necesitar ajustar las condiciones de craqueo).
• Evitar estrictamente la contaminación cruzada (usar cabezas de pistola y tiras de pipeta especiales).
• Si los resultados son anormales, se recomienda volver a probar o contactar con el soporte técnico del proveedor del kit.

Operación del kit de prueba Elisa de elastasa de pez cebra
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