Inactivador rnasafe eficiente rnase

¡¡ los productos de la compañía son solo para investigación científica y no se pueden utilizar para diagnóstico clínico!

Condiciones de conservación: - 20 ℃ conservar durante más de medio año.

Introducción del producto:

Rnasafe contiene varios compuestos especiales que inactivan la rnase y eliminan eficientemente posibles rnase en diversas soluciones o amortiguadores de reacción, evitando así la degradación del arn. Rnasafe se puede utilizar para preparar suspensiones de ARN y se puede agregar a las reacciones de varios ARN (como transcripción in vitro, transcripción inversa, RT - pcr, preparación de sondas, hibridación molecular, nuclear Protection assey, etc.). Inactivar las posibles trazas de contaminación por rnase, mantener la estabilidad del ARN y obtener mejores resultados experimentales.

Características del producto:

1. adecuado para varios amortiguadores, incluidos los sistemas de amortiguadores tris y mops que no pueden ser tratados por depc.

2. eliminar las trazas de rnase de la solución de manera segura y conveniente.

3. la solución tratada se puede volver a tratar en cualquier momento (60 ° C 10 - 20 min) para eliminar cualquier posible contaminación posterior por rnase.

4. no afecta la actividad de las transcriptasas inversa, las polimerasas de ARN y las polimerasas de ADN resistentes al calor, y se puede utilizar para la transcripción inversa y la reacción de transcripción in vitro.

5. después del tratamiento, no se necesita esterilización a alta presión.

Método de uso:

1. este producto es un concentrado de 20 × y se diluye 20 × rnasafe a una concentración de trabajo de 1 × en la solución general a tratar o en el amortiguador de reacción. Por ejemplo: se pueden agregar 5 μl rnasafe a 95 μl de solución a tratar.

2. tratar a 60 ° C durante 20 minutos para inactivar rnase. La solución tratada con rnasafe se enfría a temperatura ambiente y se puede usar. La solución tratada se puede volver a tratar (60 ° C durante 10 - 20 minutos) para eliminar la posible contaminación por rnase durante el almacenamiento. Después de enfriar la solución a temperatura ambiente, se añaden preparaciones enzimáticas sensibles a altas temperaturas, como la Transcriptasa inversa.

PCR¿¿ qué reactivos y equipos se necesitan para la reacción?

Reactivos:
plantillaADN:PCRLa respuesta requiere una plantillaADNComo la extracción de células, tejidos, sangreADNEtc.; Primer:PCRLos dos primeros de la reacción, respectivamente, con la plantillaADNLos Primers también se pueden sintetizar en regiones específicas necesarias para la amplificación emparejada en ambos extremos.TALos primeros utilizados en el proceso de clonación, etc.;dNTP:PCRSe necesitan cuatro tipos de reaccionesdNTP, incluido el ácido DesoxiadenilatodATP), ácido desoxitimidinadCTP), ácido desoxiguanídicodGTP), desoxiciclinadTTP), para la División celular,ADNProcesos biológicos como la síntesis paraPCRPlantilla amplificadaADNExtensión y amplificación de la cadena;ADN de TaqPolimerasa:PCRPolimerasa necesaria para la reacción, uso generalTaqPolimerasa, y algunos otros tipos de polimerasa comoPFU,FusiónEtc., para amplificaciónADNCadena;Tampón de PCRSolución: síPCRLa reacción tiene un efecto amortiguador y regula la reacción.El pH, tiosulfato de hidrógenoSDSLos compuestos orgánicos de moléculas pequeñas, como el formaldehído, pueden aumentarPCREspecificidad de la respuesta, mejorando así la eficiencia de la respuesta; Sistema de enzima:PCRLa amplificación a menudo implica pasos experimentales como recombinación, construcción y secuenciación, y a menudo requiere operaciones de enzima.MARCA:Un estándar de peso molecular para distinguirADNUna herramienta del tamaño de un fragmento.ADNKit de purificación: para purificaciónPCRProductos de reacción;
Equipo:
PCRMedidor: para controlar la temperatura de reacción, garantizarPCRControl estricto de los diferentes enlaces de temperatura durante la reacción; Tanque de electrolisis: para la SeparaciónPCRProductos amplificados; Extractor de ácido nucleico: extracción totalmente automática de ácido nucleico de muestras de tejido. Estos reactivos y equipos estánPCREn la tecnología de biología molecular, solo se puede llevar a cabo sobre una base ordenada y completa.PCRReaccionar y obtener resultados precisos.

PCRExperimentos básicos relacionados:

PCRLos pasos básicos de la reacción, la reacción en cadena de la polimerasa en general, consiste en20a35Cada ciclo consta de los siguientes ciclos:3Pasos:

I. transexualidad:

Aprovechar las altas temperaturas..93-98℃) hacer doble cadenaADNSeparación. Las altas temperaturas conectarán dosADNEl enlace de hidrógeno de la cadena se rompe. Antes del primer ciclo, por lo general se calienta durante más tiempo para garantizar la separación de la plantilla y el primer, y solo existe en forma de cadena única. Tiempo del paso1 - 2Min, siguientePCREl medidor controla la temperatura y entra en la etapa de ciclo.

II. recocido o unión,Reproducción:

EnADNDespués de la separación de la doble cadena, la temperatura se reduce para que el primer pueda unirse a la única cadena.ADNArriba. La temperatura en esta etapa suele estar por debajo del punto de fusión del primer5℃. La temperatura de recocido incorrecta puede hacer que el primer no se adhiera a la plantilla o se adhiera erróneamente. Tiempo del paso1 - 2Min.

3. extensión:

ADNLa polimerasa comienza por los Primers Unidos al enfriarseADNLa cadena sintetiza cadenas complementarias. La temperatura en esta etapa depende deADNPolimerasa. El tiempo de paso depende de la polimerasa y de la necesidad de sintetizarADNLongitud del fragmento. TradicionalTaqSíntesis estimada1000bp / min, más nuevoTbr(de bacterias termofílicasBrucelosis) aproximadamente40Segundos, la polimerasa de fusión producida por empresas comerciales solo necesita aproximadamente10 - 15Segundos.

PCROptimización de las condiciones de reacción:

1, temperatura y tiempo de desnaturalización:

Plantilla de garantíaADNResolver la cadena es garantizar todoPCRLa clave del éxito de la amplificación. calentar90~95°C, 30~60sNo importa lo complicado que seaADNLas moléculas también pueden transformarse en cadenas únicas. La temperatura es demasiado alta o la duración de la alta temperatura es demasiado larga, lo que puedeTaqActividad enzimática ydNTPLas moléculas causan daños.

2, temperatura y tiempo de renacer:

PCRLa especificidad de la amplificación depende de la Unión del primer a la plantilla durante el proceso de renaturalización. Cuanto mayor sea la temperatura de renaturación, mayor será la especificidad del producto. Cuanto menor sea la temperatura de renaturación, menor será la especificidad del producto. Debe basarse en el primerTmEl valor se establece específicamente.

3, temperatura y tiempo de extensión:

Por lo general, se encuentra enTaqTemperatura de acción óptima de la enzima70~75°CEntre. El primer es menor que16Cuando se trata de nucleótidos, la temperatura de extensión demasiado alta no es propicia para la Unión de los primeros con la plantilla y se puede calentar lentamente hasta70~75°C. El tiempo de reacción extendido, que puede depender de la longitud del fragmento a amplificar, es menor que1kb, 1minSuficiente; Mayor que1 KbSe necesita una extensión más larga.TaqLa enzima puede basarse en1 kb/minAumentar el tiempo. Aquí hay que tener en cuenta que la extensión excesiva puede producir amplificación no específica. Por lo tanto, es necesario establecer el tiempo de extensión adecuado.

4, número de ciclos:

Después de seleccionar otros parámetros,PCREl número de ciclos depende principalmente de la plantillaADNConcentración. En teoría20¿¿ qué?25Después del segundo ciclo,PCRLa acumulación de productos puede alcanzar el valor máximo, y en la práctica, debido a la tasa de producción de cada paso de reacción, es imposible alcanzar.100%Por lo tanto, independientemente de la concentración de la plantilla,20 a 30El segundo es un número razonable de ciclos. Cuanto mayor sea el número de ciclos, mayor será la amplificación no específica.

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