Rnafixer solución de almacenamiento de muestras de ARN sin nitrógeno líquido

Atributos del producto:

Condiciones de conservación:

Conservar a temperatura ambiente (18 - 25 ° c) durante más de 1 año, si se encuentra precipitación o precipitación cuando se utiliza, se puede agregar un baño de agua a 37 ° c.Después de la resolución térmica, se utiliza, y después de la resolución, no afectará la calidad del producto.
Introducción del producto:
Rnafixer es un líquido líquido líquido no tóxico para la conservación de tejidos que puede penetrar rápidamente en el plasma de células de tejidos frescos.En, estabilizar y proteger in situ el ARN dentro de la célula en un Estado no congelado. La inmersión en rnafixer inmediatamente después de la extracción de la lámina de tejido para su conservación no afecta la calidad y cantidad de ARN extraído en el futuro. Rnafixer elimina las muestras de ARN que deben tratarse de inmediatoO la inconveniencia de tener que conservar nitrógeno líquido. Después de sumergirse en rnafixer, el ARN en las células de tejido fresco puede estar intacto enConservar a 37 ° C durante un día, a 25 ° C durante una semana, a 4 ° C durante un mes y a - 20 ° c o - 80 ° C durante mucho tiempo.
Las muestras de virus ARN (como el VHC y el vih) se pueden conservar a 37 ° C durante un mes.Adecuado para tejidos animales (corazón, hígado, riñón, músculo, testículos, cerebro, bazo, etc.), células cultivadas, virus arn, frutasMoscas, bacterias, glóbulos blancos, algunos tejidos vegetales, etc.
Características del producto:
1. fácil de operar: se organizará en el tamaño adecuado y se sumergirá en rnafixer para que su ARN no se degrade.
2. no se necesita nitrógeno líquido: deje que la conservación de la muestra no necesite nitrógeno líquido, hielo seco o refrigerador a - 80 ° c, especialmente adecuado para muestras clínicas y de campoRecolección rápida y a gran escala.
3. transporte conveniente: las muestras procesadas se pueden conservar a 25 ° C durante una semana, lo que facilita y barato el envío y transporte de las muestras, lo que es beneficiosoCooperación e intercambio académico.
4. congelación y deshielo múltiples: las muestras procesadas por rnafixer se pueden congelar y deshielo repetidamente muchas veces, durante las cuales las muestras se pueden tratar de varias maneras.Sin afectar la calidad del ARN finalmente extraído.
5. fuerte comparabilidad: rnafixer puede reducir los errores en el procesamiento de muestras a gran escala y aumentar la comparabilidad entre los números de experimentos, lo que es particularmente útil para el análisis de perfiles de expresión genética a gran escala.
Instrucciones de uso:
Rnafixer solo se utiliza para tejidos frescos, y está prohibido congelar tejidos antes de remojarlos en rnafixer. Solo hay que ser rápidos para poner el nuevoEl tejido fresco crece, es ancho, es alto y tiene un espesor de menos de 0,5 centímetros en cualquier lado. basta con remojarlo en rnafixer (siempre que haya un lado grueso).El grado no supera los 0,5 centímetros, rnafixer puede penetrar rápidamente y el tamaño de los otros lados no es importante). Grupo frescoEl tejido está empapado en 5 veces el volumen de rnafixer y se almacena a la temperatura adecuada según las instrucciones.
1. el rnafixer de tejido animal no destruye ni disuelve la estructura del tejido, por lo que se sumerge en el rnafixer para lograr la penetraciónEl tejido equilibrado se puede extraer del rnafixer, luego cortar en trozos más pequeños y luego volver a colocarlo en el rnafixerContinúe usándolo la próxima vez. Los órganos pequeños, como el hígado, los riñones y el bazo de los ratones, no necesitan ser cortados y se pueden almacenar completamente en rnafixer.
Uso recomendado de rnastore en muestras de diferentes tejidos:

2. muchos tejidos vegetales se pueden remojar directamente en rnafixer, y algunas plantas tienen barreras de penetración naturales como la cera.La capa protectora debe destruir primero la capa de cera para facilitar la penetración de rnafixer.
3. después de soplar las células de cultivo de tejidos, centrifugar para recoger las células, descartarlas y lavarlas una vez con un amortiguador PBS en baño de Hielo.Eliminar el medio de cultivo residual. Las células se suspendieron en una pequeña cantidad de tampón pbs. Añadir de cinco a diez veces el volumen rnafixer, mezclarTodos.
4. para la conservación de los glóbulos blancos en toda la sangre, los glóbulos blancos deben separarse de los glóbulos rojos y el suero y dividirse en grupos.Después de que las células de cultivo de tejidos se tratan como si fueran tratadas, los glóbulos blancos se pueden conservar eficazmente en rnafixer. No tome sangre entera, plasmaO los ARN del suero se conservan en rnafixer porque tienen niveles de proteínas excesivos y se mezclan con rnafixerEs fácil formar precipitaciones insolitibles.
5. bacterias
Las bacterias no crecen en rnafixer, pero rnafixer no destruye las bacterias, E. coli se conserva a 4 ° CEl ARN completo todavía se puede proponer durante meses.
Almacenamiento de muestras en rnafixer:
1. conservar a - 80 ° CLas muestras se conservan durante mucho tiempo. Coloque la muestra en el fijador de ARN a 4 ° C durante la noche y luego retire la muestra, en la medida de lo posible.Retire el líquido rnafixer limpio y colócalo a - 80 ° c. Para las células cultivadas en tejidos, no es necesario eliminarlasRNAfixer， Congelar directamente a - 80 ° C no agrieta las células. Las muestras se pueden derretir a temperatura ambiente cuando se usan, yTambién se puede volver a congelar sin afectar la integridad y el rendimiento del arn.
2. conservar a - 20 ° CLas muestras de rnafixer se colocaron a 4 ° C durante la noche y luego se trasladaron a - 20 ° c. Las muestras a - 20 ° C no se congelanCongelado, pero puede formar algunos cristales, lo que no afectará la extracción futura de arn. Las muestras se pueden usar en la SalaSe derrite a temperatura y también se puede congelar de nuevo sin afectar la integridad y la producción de arn.
3. conservar a 4 ° CLas muestras se pueden almacenar a 4 ° C durante un mes.
4. conservar a 25 ° CEl ARN almacenado en una muestra de 25 ° C se mantuvo intacto durante una semana, y el ARN de la muestra conservada durante dos semanas se degradó ligeramente.Apenas se puede usar en análisis del norte, pero la calidad es suficiente para la protección nuclear o RT - pcr.
5. conservar a 37 ° CEl ARN almacenado en una muestra de 37 ° C se mantuvo intacto durante 24 horas y se degradó parcialmente a los 3 días.Rnafixer conserva la extracción de ARN de la muestra:Sacar la muestra del rnafixer, que se puede verter directamente en la piscina y enjuagarla con agua del grifo sin necesidadTratamiento especial.
1. organización
Retire la muestra del rnafixer con unas pinzas limpias y, después de absorber ligeramente el rnafixer residual con papel absorbente de agua,El ARN se puede extraer siguiendo el procedimiento estándar de molienda de nitrógeno líquido y luego homogeneización, al igual que el tejido fresco.
2. células
Hay dos opciones para las células almacenadas en rnafixer. Una es extraer el ARN después de eliminar rnafixer, y la otra esUna se extrae directamente de una mezcla de células y rnafixer.
1) extracción de ARN tras la eliminación de rnafixerLas células almacenadas en rnafixer se vuelven menos frágiles y pueden soportar una mayor velocidad centrífuga sin ser agrietadasResolver. Tenemos la experiencia de recoger células con éxito en centrifugación 5000g, porque la intensidad de cada célula es diferente, se puedePrimero haga un ensayo previo con células no importantes para garantizar que la centrifugación a la velocidad de uso no destruya las células. Otra elecciónSe opta por diluir la mezcla de rnafixer y células con un volumen igual de PBS antes de la centrifugación para reducir la densidad de la solución,Hacer que la solución celular pueda precipitarse.
2) extracción directa de ARN sin eliminar rnafixer
También se puede agregar directamente 10 veces el volumen de reactivos de extracción en un solo paso (como tripure, tripreagent) a las células yMezcla de rnafixer y luego siga los pasos normales.

PCR¿Pasos básicos y precauciones?

I. principios experimentales

PCREs una amplificación selectiva artificial in vitro.ADNUn método similar al de un organismo vivoADNCopia de. Dentro del OrganismoADNLa replicación requiere plantillas, primers,ADNPolimerasa,ADNCiclasa,dNTP; y in vitroPCRLas reacciones también requieren ingredientes similares, con plantillas, primers,Tampón PCR,TaqEnzimas,dNTP. entre ellos, los primeros son secuencias específicas diseñadas artificialmente para lograr la amplificación de posiciones específicas;Tampón PCRProporcionar un entorno de amortiguación para la reacción; El proceso de reacción es el mismo que dentro del organismo,ADNLa doble cadena se abre, los primeros se unen a la plantilla y se extienden para formar una nueva cadena. Y estos procesos dependen del organismo.ADNLa cadena de desaturación se realiza in vitro controlando la temperatura de reacción. Como de uso común94℃Plantilla de desnaturalizaciónADNAbrir la doble cadena, unir los primeros a la plantilla a la temperatura de recocido y finalmente72℃Completar la extensión y repetir el proceso para lograr un segmento específicoADNUna gran expansión. No se produce un objetivo de armonía hasta que comienza el tercer cicloADNEl mismo tramoADNMoléculas que circulan aún más para producir dianasADNEl índice de la sección se duplica.

En la etapa posterior a la amplificación,Debido a la acumulación de productos,Convierte la respuesta que originalmente se amplificó exponencialmente en una curva plana,El producto ya no aumenta significativamente con el número de ciclos,Esto se llama efecto plataforma. Período de la plataforma(Meseta)Esto hará que los productos no específicos de baja concentración producidos originalmente debido al desajuste sigan expandiéndose en grandes cantidades y alcancen niveles altos. Por lo tanto, el número de ciclos debe ajustarse adecuadamente para terminar la reacción antes del período de plataforma y reducir los productos no específicos. Llegar al período de la plataforma(Meseta)El número de ciclos necesarios depende de la copia de la plantilla en la muestra.

II. ingredientes principales

1.La plantilla puede ser de varias formas, incluyendo principalmente el GenomaADN, plasmídeosADN, genoma portador del virusADN,PCRProductos,ADNcEspera, pero no paraARN. para diferentes tipos de plantillas, la principal diferencia radica en el tiempo de predisposición y la cantidad de plantillas. Generalmente para genomas grandesADNTiempo de predisposición10 minutosSuficiente, plasmídeoADNA2min, genoma portador del virusADNPredispersión2 minutos,PCRPredisposición del producto2 minutosEstá bien.

atenciónADNcPara una sola cadenaADNPero todavía se puede hacerPCRLa plantilla, pero en la primera ronda del ciclo, solo se une un primer para sintetizar otra cadena. A partir de la segunda ronda, ambos Primers se combinan con puntos heterogéneos especiales, logrando así una combinación con los convencionales.PCRConexión. Y el mismo como una sola cadenaARNPero no se puede llevar a caboPCRLa razón de la amplificación es lograrPCRLa reacción esADNPolimerasa, solo se puede identificar deliberadamenteADNCadena.

2.Para la cantidad de plantilla, en general25ulSistemaADNLa calidad es50100ng. para el GenomaADNDebido a su estructura más compleja, la concentración extraída a menudo es relativamente grande, para evitar concentraciones excesivas.PCRAfecta, por lo que es necesario extraerADNSe realiza una dilución gradiente. De lo contrario, una concentración demasiado alta puede causar una amplificación no específica. Para plasmídeos yPCRDebido a su estructura simple y la concentración de extracción generalmente baja, el producto no necesita ser diluido.

Productos que la compañía está vendiendo:

PCR¿¿ cuáles son los problemas a los que se debe prestar atención en el experimento?¿¿ qué?

nadaCTvalor

Resultados de la prueba encontradosCtSituación del valor,Investigar si hay los siguientes problemas:

1, el número de ciclos no es suficiente(Por lo general, no más de45ciclo,No solo aumenta el valor de fondo,La cuantificación no es exacta.);

2,PCRError en la configuración del programa,Los pasos para detectar la señal fluorescente son incorrectos. generalSGAdopción de la ley72℃Recolección durante la extensiónEl TaqManLa Ley generalmente recoge la señal al final del recocido o al extenderse.,Además, si se selecciona la recolección de fluorescenciaV;

3, degradación de primer o sonda. Se puede aprobarPáginaDetección de la degradación de los primeros y las sondas por PCRV;

4La cantidad de plantilla puede degradarse o la cantidad de muestra es insuficiente.(No más de500ng,De acuerdo con las instrucciones del kit),Las muestras con concentraciones desconocidas deben comenzar con la concentración máxima de la serie de muestras diluidas.V;Si se produce una degradación de la plantilla,Se debe considerar la introducción de impurezas en la preparación de la muestra y la congelación y deshielo repetidos.,Se recomienda empaquetar las muestras de la plantilla en pequeñas reservas.,Evitar la congelación y descongelación repetidasV;

5, si la sonda de primer es adecuada(Especialmente los primeros cruzan intrones,Para garantizar la expansión del genomaADN;Primer aguas arriba y aguas abajoTmValor superior4℃Lo anterior también afectará la amplificación.(...).

CTDemasiado tarde

En una cuantificación relativa, CtLos valores generalmente se controlan en1525Es mejor entre ellos.,Si en la cuantificación absoluta,Para muestras con bajo número de copias, CtEl valor aumentará,Pero en general, no debe exceder40ciclo,De lo contrario, la cuantificación es inexacta.

Por lo tanto,juzgarCtSi es anormal que el valor aparezca demasiado tarde,Es necesario llevar a cabo de acuerdo con el diseño experimental específico y el propósito.

1, la eficiencia de amplificación es baja. La proporción entre los primeros o entre los primeros y la sonda no es adecuada,Es necesario optimizarV;Diseño irrazonable del primer o la sonda,Necesidad de rediseñarV;

2,PCRProcedimiento inadecuado,Cambiar a un método de tres pasos para reaccionar,O optimizar el recocido/.Temperatura de extensión,La temperatura de recocido se puede reducir adecuadamente.V;Recolocación/.El tiempo de extensión es corto(Se puede extender en las condiciones de tiempo recomendadas10s);

3,MgCl2Concentración inadecuada,Aumentar la concentración de iones de magnesio, etc.PCRDegradación de varios componentes de reacción o falta de dosis de muestraV;

4,PCREl producto es demasiado largo.PCREl diseño del producto supera500bp;

5. Hay inhibidores en la plantilla. Se realiza con una plantilla de alta purezaPCRDetectar o diluir la plantilla.