Servicio experimental de proteólisis bidimensional

I,Servicio experimental de proteólisis bidimensionalIntroducción a la tecnología experimental

El 2d - BM es una tecnología formada por la combinación de la página bidimensional y el Blot occidental tradicional. El proceso experimental general es que la mezcla de proteínas antigénicas se aísla primero a través de la página web bidireccional, luego la proteína de gel se transfiere a la membrana de apoyo y luego se colorea a través de la hibridación de anticuerpos. La tecnología 2d - BM puede detectar pequeños cambios en puntos eléctricos o pesos moleculares como antígenos, y tiene una buena aplicación en el estudio de la modificación después de la traducción de proteínas; Por su parte, la espectrometría de masas combinada 2d - BM permite encontrar antígenos más inmunogénicos de una mezcla de proteínas.

En segundo lugar,Servicio experimental de proteólisis bidimensionalResumen

El 2d - BM es una tecnología formada por la combinación de la página bidimensional y el Blot occidental tradicional. El proceso experimental general es que la mezcla de proteínas antigénicas se aísla primero a través de la página web bidireccional, luego la proteína de gel se transfiere a la membrana de apoyo y luego se colorea a través de la hibridación de anticuerpos. La tecnología 2d - BM puede detectar pequeños cambios en puntos eléctricos o pesos moleculares como antígenos, y tiene una buena aplicación en el estudio de la modificación después de la traducción de proteínas; Por su parte, la espectrometría de masas combinada 2d - BM permite encontrar antígenos más inmunogénicos de una mezcla de proteínas.

III. contenido del servicio

1. extracción y cuantificación de proteínas;

2. página bidimensional;

3. película giratoria, cerrada, incubada, mostrando imágenes.

IV. proceso de operación experimental

1. el segundo elemento es la enzima SDS - apge.

2. después de la segunda electrografía, se extrae el gel para la transferencia de película, y el método de transferencia de película puede elegir la transferencia húmeda y la transferencia semiseca. Las membranas comunes son las membranas NC y pvdf.

3. cerrado, 5% leche desnatada en polvo o 5% BSA cerrada durante 1 hora (temperatura ambiente) o noche (4 grados).

4. una anti - incubación, de acuerdo con las instrucciones de anticuerpos para seleccionar el tiempo de incubación, las condiciones de incubación convencionales son de 1 hora o 4 grados a temperatura ambiente durante la noche, una anti - incubación después de extraer la membrana

Tbst se lava 3 veces, 5 minutos cada vez.

5. incubación de Resistencia secundaria: seleccione la resistencia secundaria adecuada (anti - rata, anti - humana, anti - conejo, etc.) de acuerdo con la resistencia primaria. después de una hora de incubación a temperatura ambiente, retire la película tbst para lavarla tres veces durante 5 minutos cada vez.

6. desarrollo: diluir los sustratos a y b proporcionalmente y diluirlos uniformemente sobre la película, colocarlos en la película en la Cámara oscura, taparlos con un clip de película, exponerlos durante un cierto tiempo y ponerlos en el desarrollador para desarrollarlos, hasta que aparezcan bandas claras de proteínas, enjuagarlos con agua limpia y fijarlos en el fijador, el tiempo de exposición debe considerar factores Como la cantidad de muestras de proteínas, la concentración de dilución de anticuerpos y el tiempo de incubación de anticuerpos en la plataforma integral.

7. después de la fijación, limpie la película, seque, calibrar el marcador, escanee las imágenes y analice las imágenes de 2d Western blot.

Instrucciones para la entrega de muestras, para garantizar el buen desarrollo del servicio técnico 2d Western blot, el envío de muestras debe cumplir con los siguientes requisitos:

1. proporcionado por el cliente: tejidos, células, soluciones proteicas, etc.; Yikang (se puede entregar a Yanjin Company para su compra).

2. requisitos de transporte: embalaje y envío de hielo seco o nitrógeno líquido.

Nota: las muestras deben evitar todo tipo de contaminación y congelación y deshielo repetidos.

V. contenido del informe de servicios técnicos

1. resultados cuantitativos de proteínas y cantidad de muestras en la página;

2. resultados del análisis de la película original, la imagen electrónica y la imagen;

3. informe experimental completo de 2d Western blot, incluidos los pasos experimentales, el uso de instrumentos y reactivos, etc.

Anexo: pasos experimentales de 2d Western blot

1. preparación de muestras de proteínas 2d Western blot, el principio principal de la preparación es disolver todas las proteínas en la medida de lo posible, destruir la interacción entre proteínas y proteínas, evitar todo tipo de sustancias interferentes, la preparación de muestras es compatible con el ief, etc.

2. los principales pasos de la CE bidireccional, el artículo - electricidad (ief), el equilibrio de tiras adhesivas, el segundo artículo de la CE SDS - apge.

3. después de la segunda electrografía, se extrae el gel para la transferencia de película, y el método de transferencia de película puede elegir la transferencia húmeda y la transferencia semiseca. Las membranas comunes son las membranas NC y pvdf.

4. cerrado, 5% leche desnatada en polvo o 5% BSA cerrada durante 1 hora (temperatura ambiente) o noche (4 grados).

5. - Anti - incubación, de acuerdo con las instrucciones de anticuerpos para seleccionar el tiempo de incubación, las condiciones de incubación convencionales son de 1 hora o 4 grados a temperatura ambiente durante la noche, una vez anti - incubación, se extrae la película tbst para lavarla tres veces, cada vez durante 5 minutos.

6. incubación de Resistencia secundaria: de acuerdo con la resistencia, elija la resistencia secundaria adecuada (anti - rata, anti - humana, anti - conejo, etc.), después de incubar a temperatura ambiente durante 1 hora, retire la película tbst para lavarla tres veces, cada vez durante 5 minutos.

7. desarrollo: diluir y mezclar los sustratos a y b proporcionalmente y gotear uniformemente en la película, colocar la película en la película en la Cámara oscura, cubrir el clip de presión, poner la película en el desarrollador después de un cierto tiempo de exposición para desarrollar, hasta que aparezcan bandas claras de proteínas, enjuagar con agua limpia y fijar en el fijador, el tiempo de exposición debe considerar exhaustivamente las proteínas. Factores como la cantidad de muestra, la concentración de dilución de anticuerpos y el tiempo de incubación de anticuerpos.

8. después de la fijación, limpie la película, seque, calibrar el marcador, escanee las imágenes y analice las imágenes de 2d Western blot.

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