Kit Elisa de Trehalosa - 6 - ácido fosfórico vegetal (t6p)

　　Kit Elisa de Trehalosa - 6 - ácido fosfórico vegetal (t6p)Manual de instrucciones

BS - 8050 - a Trehalosa vegetal - 6 - ácido fosfórico (t6p) kit 96t

BS - 8050 - B Trehalosa vegetal - 6 - ácido fosfórico (t6p) Kit Elisa 48t

I. principios experimentales

Este Kit utiliza la prueba de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos (elisa) para detectar los niveles de t6p en tejidos o células vegetales. La placa microporosa preenvasaba anticuerpos anti - t6p, y después de que t6p se unió a anticuerpos sólidos en la muestra, se agregó un complejo formador de anticuerpos secundarios marcado por la superóxidasa de rábano picante (hrp). Al agregar el sustrato tmb para colorear, tmb se convirtió en azul catalizado por hrp, amarillo después de la terminación del ácido, la profundidad de color se relacionó positivamente con la concentración de t6p en la muestra, y la concentración calculada por absorción se determinó a una longitud de onda de 450 nm.

II. composición del kit

Condiciones de conservación de las especificaciones de los componentes

Preenvasada con placa microporosa de 12 agujeros x 8 tiras selladas y secas a 2 - 8 ℃.

Polvo liofilizado estándar - 20 ℃ disuelto y empaquetado

La marca HRP detecta que el líquido de anticuerpos evita la luz 2 - 8 ℃.

Sustrato de color (tmb) líquido a + líquido B está disponible para evitar la luz.

Líquido de terminación 2M temperatura ambiente de ácido sulfúrico

El líquido de lavado concentrado se disuelve y cristaliza en un baño de agua a 40 ° C

Muestra el líquido xishi contiene un estabilizador

Nota: puede haber diferencias en los componentes de diferentes marcas, consulte las instrucciones específicas para más detalles.

III. procesamiento de muestras

1. tipo de muestra

Tejido vegetal: pesar 0,1g de tejido, añadir 1 ml de líquido de extracción homogeneizado de baño de hielo y centrifugar para extraer el sobrenadante.

‌ células / bacterias: desechar el sobrenadante después de recoger la centrifugación y romper las células por ultrasonido para extraer el sobrenadante.

2. condiciones de conservación

A corto plazo: conservación a 2 - 8 ° C ≤ 48 horas.

A largo plazo: congelar a - 20 ℃ después del embalaje para evitar la congelación y descongelación repetidas.

3. recomendaciones de dilución

‌ muestras convencionales: se recomienda diluir 5 - 20 veces (por ejemplo, tomar una muestra de 20 μl + diluyente de 180 μl).

Muestras de alta concentración: es necesario determinar experimentalmente el múltiplo de dilución, con una dilución máxima de 100.000 veces (método de dilución en tres pasos).

IV. pasos operativos

Preparación de productos estándar

El estándar liofilizado se disuelve con una dilución de 1 ml, se mezcla bien y se deja reposar durante 10 minutos.

Realizar una serie de diluciones (como 8pmol / L → 4pmol / L →... → 0,5pmol / l).

Añadir muestra

Agujero estándar: 50 μl / agujero.

Agujero de la muestra: primero se agrega una dilución de 40 μl y luego una muestra de 10 μl (dilución total de 5 veces).

Agujeros en blanco: sin muestras y resistencia secundaria.

Eclosión

Incubar a 37 ° C durante 120 minutos y lavar la placa 3 veces (remojar 1 minuto cada vez).

Color y terminación

Cada agujero se añade 100 μl de líquido de color tmb y se incuba a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

Añadir 50 μl de líquido de terminación para detener la reacción y medir el valor de od en 30 minutos.

V. precauciones

Evitación de muestras: muestras que contienen Azida de sodio (nan3) (inhibición de la actividad de hrp).

Equilibrio del reactivo: equilibrio de temperatura ambiente antes de usar durante 20 minutos, el detergente concentrado necesita un baño de agua de 40 ° C para disolver la cristalización.

Control de calidad: se recomienda establecer agujeros compuestos, y la curva estándar R m2 debe ser ≥ 0,95.

VI. análisis de los resultados

Curva estándar: dibuja una ecuación de cuatro parámetros con valores de od para la concentración.

Cálculo de la concentración: el valor de do de la muestra se sustituye por la ecuación de la curva y luego se multiplica por el múltiplo de dilución.

Nota: lo anterior es solo para referencia, no como datos reales, los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos.

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