Kit de Elisa de Péptido similar al glucagón humano 1 (glp - 1)

　　Kit de Elisa de Péptido similar al glucagón humano 1 (glp - 1)Manual de instrucciones

BS - 0203 - a Péptido similar al glucagón humano 1 (glp - 1) kit 96t

BS - 0203 - B Péptido similar al glucagón humano 1 (glp - 1) Kit Elisa 48t

I. principios experimentales

Este Kit utiliza el método de sándwich de doble anticuerpo para detectar los niveles de GLP - 1 en suero humano, plasma o sobrenadante de cultivo celular. Sus pasos centrales incluyen:

‌ recubrimiento de anticuerpos de fase sólida: precombalaje de microplacas para purificar anticuerpos monoclonales contra el GLP - 1.

‌ Unión de antígenos y anticuerpos: GLP - 1 se une a anticuerpos sólidos en la muestra, y luego se agrega un complejo formador de dos anticuerpos marcado por superóxidasa de rábano picante (hrp).

Reacción de color: añadir el sustrato tmb para desarrollar el color, determinar la absorción a una longitud de onda de 450 nm después de la terminación del ácido, y la concentración es proporcional a la profundidad de desarrollo del color.

II. composición del kit

Nota sobre las especificaciones de los componentes

Placa microporosa preenvasada de 12 agujeros x 8 tiras que contienen anticuerpos contra el GLP - 1

Estándar 0,5 ml / botella de polvo liofilizado, necesita ser resolvable

HRP marca dos resistencias a 6 ml de conservación a la luz

Sustrato de color (tmb) a líquido 6ml + B líquido 6ml actual

Líquido de terminación 6 ml de ácido sulfúrico 2M

El detergente concentrado de 20 ml debe diluirse a 1: 20.

Muestra xishi líquido 6 ML con estabilizador

Nota: puede haber diferencias en los componentes de diferentes marcas, consulte las instrucciones específicas para más detalles.

III. procesamiento de muestras

1. tipo de muestra

Suero / plasma‌ EDTA o Heparina anticoagulantes, centrifugados para extraer el suero superior.

Desbridamiento celular: centrifugación 1000 × G durante 20 minutos para eliminar impurezas.

Homogeneizado de tejido: después de la lisis, se extrae por centrifugación y se aclara.

2. condiciones de conservación

A corto plazo: conservación a 2 - 8 ° C ≤ 48 horas.

A largo plazo: congelar a - 20 ° c o - 80 ° C después del embalaje, evitando la congelación y descongelación repetidas.

3. recomendaciones de dilución

‌ muestras convencionales: se recomienda diluir 5 - 20 veces (por ejemplo, tomar una muestra de 20 μl + diluyente de 180 μl).

Muestras de alta concentración: es necesario determinar experimentalmente el múltiplo de dilución, con una dilución máxima de 100.000 veces (método de dilución en tres pasos).

IV. pasos operativos

Preparación de productos estándar

El estándar liofilizado se disuelve con una dilución de 1 ml, se mezcla bien y se deja reposar durante 10 minutos.

Realizar una serie de diluciones (como 8pmol / L → 4pmol / L →... → 0,5pmol / l).

Añadir muestra

Agujero estándar: 50 μl / agujero.

Agujero de la muestra: primero se agrega una dilución de 40 μl y luego una muestra de 10 μl (dilución total de 5 veces).

Agujeros en blanco: sin muestras y resistencia secundaria.

Eclosión

Incubar a 37 ° C durante 120 minutos y lavar la placa 3 veces (remojar 1 minuto cada vez).

Color y terminación

Cada agujero se añade 100 μl de líquido de color tmb y se incuba a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

Añadir 50 μl de líquido de terminación para detener la reacción y medir el valor de od en 30 minutos.

V. precauciones

Evitación de muestras: hemólisis, muestras altas en grasas y muestras que contienen nan3 (inhibición de la actividad de hrp).

Equilibrio del reactivo: equilibrio de temperatura ambiente antes de usar durante 20 minutos, el detergente concentrado necesita un baño de agua de 40 ° C para disolver la cristalización.

Control de calidad: se recomienda establecer agujeros compuestos, y la curva estándar R m2 debe ser ≥ 0,95.

VI. análisis de los resultados

Curva estándar: dibuja una ecuación de cuatro parámetros con valores de od para la concentración.

Cálculo de la concentración: el valor de do de la muestra se sustituye por la ecuación de la curva y luego se multiplica por el múltiplo de dilución.

Nota: lo anterior es solo para referencia, no como datos reales, los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos.

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