Kit de prueba Elisa de ácido mirístico de ratón

Kit de prueba Elisa de ácido mirístico de ratón

Manual de instrucciones

Principio de detección

El kit utiliza el método de sándwich de doble anticuerpo en un solo paso para la prueba de inmunoabsorción enzimática..ELISA).Paquete por adelantadoSer肉豆蔻酸（Myristicacido(...)En los microporos de la envoltura de anticuerpos, se añaden especímenes, estándares,Los anticuerpos de detección marcados por HRP son incubados y lavados. Con el sustrato tmb para colorear, el tmb se convierte en azul catalizado por la peróxido y en amarillo final bajo la acción del ácido. Color claro y en la muestra肉豆蔻酸（Myristicacido(...)PresentarCorrelación positiva. Con un medidor de enzimaLa absorción (valor de do) se determina a una longitud de onda de 450 nm y se calcula la concentración de la muestra.

Métodos de recogida, tratamiento y conservación de muestras

1. suero: use un tubo de ensayo libre de pirógenos y Lps para evitar cualquier estimulación celular durante la operación. después de recoger la sangre, 3.000 centrifugadoras giran durante 10 minutos para separar el suero y los glóbulos rojos de manera rápida y cuidadosa.

2. plasma: anticoagulación con edta, Citrato o heparina. Centrifugar a 3000 RPM durante 30 minutos para despejar.

3. sobrenadante celular: 3.000 centrifugadoras durante 10 minutos para eliminar partículas y polímeros.

4. homogeneización del tejido: añadir el tejido con una cantidad adecuada de solución salina normal y triturarlo. Centrifugar a 3000 RPM durante 10 minutos para despejar.

5. conservación: si la muestra no se detecta a tiempo después de la recolección, envuélvela de acuerdo con una dosis, congelarla a - 20 ° c, evitar la congelación y descongelación repetidas, descongelarla a temperatura ambiente y asegurarse de que la muestra se cargue, descomponga y congele uniformemente.

Artículos de propiedad propia

1. Medidor de estándar enzimático..de 450 nm)

2. Muestreador de alta precisión y cabeza de pistola:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. Incubadora de 37 ° C

Precauciones operativas

1. El kit se conserva en2 - 8 ° c, use el equilibrio de temperatura ambiente anterior durante 20 minutos. El detergente concentrado extraído del refrigerador tendrá cristalización, lo cual es normal, y el calentamiento del baño de agua hace que la cristalización se disuelva antes de usarla.

2. Las tiras que no se utilizan en el experimento deben colocarse inmediatamente de nuevo en la bolsa autoaislada y conservarse selladas (secas a baja temperatura).

3. La concentración esEl estándar S0 de 0 se puede considerar un control negativo o un vacío; Al operar de acuerdo con las instrucciones, la muestra se ha diluido cinco veces, y el resultado final multiplicado por cinco es la concentración real de la muestra.

4. Siga estrictamente el tiempo, la cantidad de líquido y el orden indicados en las instrucciones para llevar a cabo la operación de calentamiento.

5. Agitar bien todos los componentes líquidos antes de usarlos.

Composición del kit

Nota: productos estándar..La concentración de S0 - s5) es la siguienteEs:0,50、100、200、400,800 pg/ml

Preparación del reactivo

Dilución de 20 × amortiguador de lavado: el agua destilada se diluye a 1: 20, es decir, una parte del amortiguador de lavado de 20 × más 19 Partes del agua destilada.

Método de lavado de placas

1. Lavado manual de placas: retire todo el líquido del agujero, llene cada agujero con líquido de lavado y deje reposarDespués de 1 minuto, tire todo el líquido en el agujero y seque el papel absorbente de agua para lavar la placa cinco veces.

2. Lavadora automática de placas: inyección de líquido de lavado en cada agujero350μL， Remoje durante 1 minuto y lave la placa 5 veces.

Pasos de operación

1. Equilibrio desde la temperatura ambienteDespués de 20 minutos, se sacan las tiras necesarias de la bolsa de papel de aluminio, y las tiras restantes se sellan y devuelven a 4 ° c con una bolsa sellada.

2. Establecer agujeros estándar y agujeros de muestra, y agregar diferentes concentraciones de productos estándar a cada agujero estándar.50 μL;

3. El agujero de la muestra se agrega primero a la muestra a medir.10μL， Añadir una dilución de 40 μl; No se agregan agujeros en blanco.

4. Además de los agujeros en blanco, se agrega superóxidasa de rábano picante a cada agujero en los agujeros estándar y los agujeros de muestra.El anticuerpo de detección marcado por hrp) es de 100 μl, el agujero de reacción está sellado con una película de sellado y el baño de agua a 37 ° c o la incubadora se incuban durante 60 minutos.

5. Descartar el líquido, secar el papel absorbente, llenar cada agujero con detergente y Dejar reposar1min， Retire el detergente y seque el papel absorbente de agua, repita el lavado de la placa 5 veces (también se puede lavar la placa con una lavadora).

6. Añadir sustrato por agujeroA y B son 50 μl cada uno, incubados a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

7. Añadir líquido de terminación a cada agujero50 μl, en 15 minutos, se determina el valor de do de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm.

Juicio de resultados

Dibuja la curva estándar: enEn la hoja de trabajo de microsoft, se toma la concentración de productos estándar como coordenada horizontal y el valor de od correspondiente como coordenada vertical, se dibuja la curva de regresión lineal de productos estándar y se calcula el valor de concentración de cada muestra de acuerdo con la ecuación de la curva.
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