Conjunto de medios de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática biológico basado en modelos

Kit organoide de colangiocarcinoma intrahepático humano

Conjunto de medios de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática humana

1, Descripción del producto

Conjunto de medios de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática humana basado en modelos biológicos..Kit organoide de colangiocarcinoma intrahepático humano) es un medio de cultivo celular definido químicamente para establecer y mantener organoides de colangiocarcinoma intrahepática humana. Los organoides tumorales de origen del paciente resumen las características genómicas y patológicas del tumor original, por lo que tienen grandes perspectivas en la investigación médica y la medicina de precisión.

2, Información del producto

3, Otros materiales y reactivos propios

4, Preparación de medios de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática humana

El medio de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática se preparó utilizando técnicas de operación estériles. La siguiente es la preparación.10 mlUn ejemplo de medio de cultivo, si la cantidad requerida es diferente, la cantidad se puede ajustar en consecuencia.

1, Descongelación sobre hielo del factor de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepáticaB(50x)Factor de cultivo de Órganos similares al colangiocarcinoma intrahepáticaC(250x).

Nota: después del descongelamiento, se recomienda el factor de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática.B(50x)Factores de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepáticaC(250x). conservar y tomar después de empaquetar por separado para evitar la congelación y descongelación repetidas.

2, Poner200 uLFactores de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepáticaB(50x),40μLFactores de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepáticaC(250x)Más a9,76 mlEn el medio básico de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática, se mezcla completamente y se prepara.10 mlMedio de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática.

Nota: el medio de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática preparado puede ser2-8°CAlmacenamiento, se recomienda usar dentro de las dos semanas. Factores de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepáticaB(50x)Contiene antibióticos bacterianos y fúngicos.

5, Cultivo primario de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática de origen del paciente

Nota: la investigación que involucre los principales materiales de tejido humano debe seguir todas las regulaciones institucionales y gubernamentales pertinentes. Antes de recoger los principales materiales de tejido humano, se debe obtener el consentimiento informado de todos los sujetos.

a) Establecimiento de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepático humano primario

1, Los fragmentos de tejido de colangiocarcinoma intrahepática primaria se recogen en una solución fría de almacenamiento de tejido primario con un tubo centrífuga. Mantener las muestras de tejido en4℃Hasta que comience la separación.

2, Evaluar si los fragmentos de tejido obtenidos están compuestos por epitelios. Si hay grasa o tejido muscular, use un cuchillo o unas pinzas bajo un microscopio anatómico para eliminar tantos de estos componentes no epiteliales como sea posible. Si no hay grasa ni tejido muscular, continúe con el siguiente paso de inmediato.

3, Con medios de cultivo básicos de órganos epiteliales oDPBSLavar el tejido dos veces.

4, Usar un cuchillo o cortar el tejido en1-3 mm³Pequeños fragmentos, colocados en una placa de Petri celular.

5, En37℃Bajo uso10 mlLa solución digestiva del tejido tumoral se encuentra en15 mlDigerir fragmentos de tejido en el tubo centrífuga, tiempo de digestión variable, de30Minutos para llegar1.5Las horas varían. Monitorear cuidadosamente el proceso digestivo puede soplar adecuadamente el líquido superior para observar el grado digestivo. Cuando la mayoría de los fragmentos de tejido pueden pasar1 mlCuando el pipeta absorbe la cabeza, el proceso digestivo se completa.

6, PonerFBSAñadir a la mezcla digestiva de tejidos, la concentración final es2%, y usar100 μmFiltro celular para filtrar.

7, Recogida y en4°CAbajo250gCélulas filtradas por centrifugación3Min. En caso de precipitación Roja visible, inhalar el sobrenadante y usar2 mlPrecipitación en suspensión pesada del lisado de glóbulos rojos, lisado de glóbulos rojos a temperatura ambiente1Minutos y en4°CAbajo250gCentrifugadora3Min.

8, Aspirar el sobrenadante y suspender la precipitación en el medio básico, en4°CAbajo250gCentrifugadora3Min, repita este paso nuevamente.

9, Aspirar el sobrenadante y suspender la precipitación en el pegamento de la matriz. El pegamento de matriz debe conservarse sobre hielo para evitar que se solidifique. El proceso se lleva a cabo lo antes posible. La cantidad de pegamento de matriz utilizado depende del tamaño de las partículas. Aproximadamente10，000Las células individuales deben vacunarse en25 μLEn el pegamento de matriz.

10, No diluya en exceso el pegamento de la matriz (la proporción del pegamento de la matriz debe ser> 70%(volumen de pegamento de matriz/.Volumen total), ya que esto puede inhibir la formación correcta de gotas sólidas. Extender el pegamento de matriz que contiene organoides sobre24En la parte inferior de la placa de cultivo de células foramen, cada gota rodea aproximadamente el centro del agujero.30μL.

Nota: una vez que los organoides se vuelven a colgar en el pegamento de matriz, la placa de semilla se realiza lo antes posible, ya que el pegamento de matriz puede solidificarse en la cabeza de succión del tubo de ensayo o pipeta. No permita que las partículas del sustrato entren en contacto con la pared del tubo.

11, Coloque la placa de cultivo en37°Cy5%COEn la incubadora15 - 25Minutos para que el gel de matriz se solidifique.

12, Preparar la cantidad necesaria de medios de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática.

13, Una vez solidificada la gota de pegamento de la matriz..15 - 25Min), abra la placa y agregue cuidadosamente a cada agujero500μLMedio de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática.

Nota: no agregue el medio directamente a la parte superior de la gota de pegamento del sustrato, ya que esto puede destruir la estructura solidificada.

14, Coloque la placa de cultivo en37℃y5%COEn una incubadora de temperatura constante.

15, Cada3 - 4Cambie el Medio una vez al día, extraiga cuidadosamente el medio del agujero y lo reemplace con un medio fresco y precalentado de organoides.

16, Monitorear de cerca el Estado de crecimiento de los organoides. idealmente, los organoides de colangiocarcinoma intrahepática deben estar en7 - 10Construido en el día.

b) Cultivo de paso de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática humana

1, Soplar y raspar los organoides con una cabeza de pistola lavada con un líquido de lavado húmedo, y transferir la suspensión de los organoides y el medio de cultivo a los organoides lavados con un líquido de lavado húmedo.1.5mLEPEn el tubo.

2, La suspensión de los organoides se vuelve a suspender con fuerza con la cabeza de la pistola lavada con una solución humectante, lo que hace que los organoides se separen del pegamento del estroma.

3, 250gFuerza centrífuga centrifugación a temperatura ambiente3 minutos.

4, Abandonar la parte superior del líquido claro, usar líquido digestivo similar a los órganos o destruir mecánicamente. Para la desconexión celular utilizando el líquido digestivo organoides, la suspensión organoides se suspende en el líquido digestivo organoides, y el pipeta sopla repetidamente hacia arriba y hacia abajo y se coloca en el37°CIncubar hasta que los organoides se separen. Use la cabeza de la pistola con filtro cada2Minutos para soplar y aspirar repetidamente hacia arriba y hacia abajo8Veces para ayudar a la disociación de los organoides. Monitorear de cerca el proceso digestivo para minimizar el tiempo de incubación en el lisado organoides. En caso de fallo mecánico, en1,5 mlSuspensión de órganos en suspensión pesada en el medio de cultivo básico de órganos epiteliales. Absorbe cuidadosamente la suspensión de organoides con una pipeta y sube y baja repetidamente.30Esta vez, esto ayudará a la digestión.

Nota: no se disuelva más de7Minutos, porque esto puede causar el crecimiento o incluso la destrucción de peores organoides. Según la experiencia, si se trata de una mezcla de células pequeñas, se puede observar que10 - 50Una masa celular compuesta por varias células, la digestión se completa.

5, Después de completar la digestión, use1 mlEl medio de cultivo básico de los órganos epiteliales se enjuaga una vez y luego a temperatura ambiente.250gCentrifugadora3Min.

6, Abandonar la parte superior de la limpieza, precipitar los órganos de suspensión pesada con una cantidad adecuada de pegamento de matriz, colocarlos sobre hielo después de la suspensión pesada, y el tiempo de suspensión pesada no excederá30 añosPara evitar la coagulación prematura del pegamento de matriz.

Nota: la proporción de dilución del pegamento de matriz debe ser70%Lo anterior garantiza la estabilidad estructural del pegamento de matriz durante el cultivo.

7, Introducir la suspensión mixta de pegamento estromal y organoides48La parte inferior de la placa del agujero es correcta, evitando que la suspensión entre en contacto con la pared lateral de la placa del agujero, cada agujero15-20uLIzquierda y derecha. Nota: para evitar que el pegamento de matriz se solidifique a temperatura ambiente, este paso debe completarse lo antes posible.

8, La placa de cultivo después de la vacunación será37℃Incubadora de dióxido de carbono15 minutosEsperar a que el pegamento de la matriz se solidifique a la izquierda y a la derecha.

9, Preparar un medio de cultivo de órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática.

10, Después de la coagulación del pegamento de matriz, se añade el medio de cultivo de Órganos similares al colangiocarcinoma intrahepática humana preparado.48Se agrega cada agujero de la placa del agujero250uLMedio de cultivo.

11, Poner48La placa del agujero se coloca37℃Se cultiva en una incubadora de dióxido de carbono hasta que los organoides necesiten más experimentos.

V2.0Edición

Tiempo de actualización:2025 / 6 / 21