Itraq TMT (cuantificación de la marca isotópica)

Cuantificación del marcador isotópico:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags) La tecnología cuantitativa de etiquetado in vitro de péptidos desarrollada por AB sciex y thermo, respectivamente, utiliza una variedad de reactivos isotópicos para etiquetar el terminal n del péptido proteico o el Grupo de cadena lateral de lisina, y reactivos de diferentes pesos moleculares etiquetan muestras de diferentes fuentes para lograr una comparación de diferentes grupos proteicos intergeneracionales.

Pasos experimentales del etraq:

1. preparación de la muestra: calcular cuantitativamente la concentración de proteínas de la muestra de la muestra a medir;

2. Alquilación y enzimolisis de reducción de proteínas: cada grupo de muestras se toma 100 μg cada una para ser tratado de acuerdo con los requisitos del kit etraq. después de la enzimolisis con una solución de Tripsina de grado de secuenciación, el tubo de ultrafiltración se centrifuga para recoger segmentos de péptidos enzimáticos;

3. etiquetado itraq: equilibrar el reactivo itraq a temperatura ambiente, disolverlo con 150 μl de alcohol isopropílico, tomar el segmento de péptido enzimático y añadir el reactivo itraq a temperatura ambiente durante 2 horas, añadir agua para terminar la reacción, mezclar diferentes grupos de muestras en cantidades iguales, congelar y secar las muestras al vacío:.

4. análisis de LC - MS - ms: identificación por espectrometría de masas en serie con q - Active orbitrap de thermo.

5. procesamiento de datos y análisis de cartas

Presentación de los resultados:

todosituaciónMapa térmico de clúster de análisis

Análisis estadístico del número de proteínas en * 0

Ciclo experimental y criterios de entrega

1. ciclo experimental: 4 - 6 semanas

2. criterios de entrega: resultados cuantitativos de proteínas, resultados de identificación, datos brutos de espectrometría de masas, resultados de análisis de shengxin (análisis g0. Análisis kegg, etc.)

Información a confirmar

1. especies y géneros de la muestra

2. tipo de muestra (tejido o células o sangre)

3. número y agrupación de muestras

4. requisitos de análisis

Referencias

XuX, Zhu Q, Zhang R, et al. Análisis proteómico basado en ITRAQ de lesión pulmonar aguda inducida por ácido oleico en

Ratones[J]. Fisiología celular y bioquímica, 2017: 1949-1964.

QuZ, GaoF, LiL, et al. Análisis proteómico cuatitativo sin etiqueta de proteínas de membrana expresadas diferencialmente

de Macrófagos Alveolares Pulmonares Infectados con Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino Altamente Patógeno

Virus y su cepa atenuada[J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.

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