Experimento de detección de MMP (2 / 9) en el espectro de la gelatinasa

Experimento de detección de MMP (2 / 9) en el espectro de la gelatinasa

El método enzimático (zymography) se basa en la detección de proteasa de SDS - Page y Tinción de gel de fase inversa para detectar la actividad de MMP - 2 y MMP - 9, con una sensibilidad de hasta 10 pg, que es más alta que el método elisa.

El principio básico y el procedimiento son: separar las muestras que contienen proteasa con un gel SDS - page con un sustrato de colagenasa, extraer el gel para incubar con una reacción enzimática Buffer después de la electrolisis, teñir y decolorar el gel. El gel se tiñe profundamente debido a que contiene proteínas de sustrato, formando un fondo oscuro, pero en la posición con bandas de proteasa, la proteasa degradará las proteínas de sustrato en el gel y, por lo tanto, no se tiñe para formar una zona translúcida, que puede indicar simultáneamente la posición de MMP - 2, MMP - 9 (espectro enzimático), que puede detectar muestras de sangre, exudado, extracto celular, etc.

Ciclo de servicio: 10 días hábiles

Los resultados proporcionan: informe de resultados, imágenes representativas, proceso de operación e información sobre reactivos e instrumentos relacionados.

Experimento de detección de MMP (2 / 9) en el espectro de la gelatinasaSe debe saber sobre el suministro de muestras:

1) el cliente informa al Grupo experimental, el número y los datos de diseño de fondo, y los requisitos específicos deben explicarse con antelación;

2) recogida, conservación y transporte de especímenes:

① muestra de tejido: el tejido fresco se conserva en nitrógeno líquido o - 70 grados, y el tejido no es inferior a 100 mg;

② células cultivadas: no menos de 2x106 células se toman a través del recuento celular en el tubo ep, se agregan 0,5 ml de solución salina normal, se mezclan y se conservan en el refrigerador (- 70 ° c, evitando la congelación y descongelación repetidas);

③ muestra de células sanguíneas: conservar la muestra de sangre con un tubo anticoagulante o separar las células con un líquido de aislamiento de linfocitos y agregar 0,5 ml de solución salina normal, conservar (- 70 ° C se puede conservar durante mucho tiempo, evitando la congelación y descongelación repetidas)

④ muestra de suero o medio de cultivo celular: después de eliminar las impurezas por centrifugación, se toma el suero y se introduce en el tubo EP para su conservación (49c se puede conservar durante 15 - 20 días y - 70 ° C se puede conservar durante mucho tiempo, evitando la congelación y descongelación repetidas)

4) transporte de muestras:

① las muestras de tejido y las muestras celulares se transportan en hielo seco;

② las muestras celulares también se pueden enviar directamente al frasco de cultivo (sellado para garantizar la no contaminación, el medio de cultivo no se escapa);

③ el suero o el líquido sobrenadante se envían directamente en bolsas de hielo (el viaje de entrega se puede llegar en casi 23 días).

Instrucciones para los clientes:

El sistema de detección contiene referencia positiva o ginseng interno, y la cotización contiene extracción de proteínas.

Precauciones del experimento:

1. al preparar la poliacrilamida, se debe prestar atención a eliminar las burbujas de aire.

2. la actividad del espectro de gelatinasa se ve afectada por factores como los iones de calcio, los iones de zinc y el valor de ph, por lo que la preparación del amortiguador debe ser estricta y precisa, tratar de utilizar agua ultrapura, y la temperatura de incubación también debe controlarse bien.

3. con un gran peine

4. el pH de la incubadora es de 7,5 - 7,6, y habrá floculantes durante el tiempo de Tritón restaurador, por lo que trate de usar una configuración fresca durante el experimento.

5. los 37 grados de incubación no deben estar en la incubadora de co2, ya que cambiará el valor de pH de la incubadora, basta en la incubadora ordinaria.

6. la gelatina debe conservarse a 4 grados y usarse dentro de una semana después de su preparación.

Servicios experimentales: