Estrategia completa del flujo de trabajo de Proteoma subcelular (incluyendo espectrometría de masas y

Estrategia completa del flujo de trabajo de Proteoma subcelular (incluyendo espectrometría de masas ySilac technology) introducción detallada del servicio técnico de detección

En la era post - genómica, la histología subcelular dànbáizhì se está convirtiendo gradualmente en una dirección clave de investigación para revelar la función celular, las vías de señalización y los mecanismos de la enfermedad. En comparación con la histología dànbáizhì a nivel celular completo, la investigación a nivel subcelular se centra en la expresión proteica, localización y cambios dinámicos dentro de organelos específicos (como mitocondrias, retículo endoplásmico, núcleos, etc.), proporcionando así soporte de datos de mayor resolución espacial.

¿I. ¿ por qué se eligió la histología subcelular dànbáizhì?

Aunque la histología tradicional de dànbáizhì ha logrado amplios resultados en el cribado de biomarcadores de enfermedades y el estudio de vías de señalización, su resolución espacial tiende a ser limitada. Por ejemplo, en las células tumorales, los cambios en la expresión a nivel proteómico completo no reflejan directamente el fenómeno de la reorientación proteica a nivel organelar.

La histología subcelular de dànbáizhì permite, mediante el aislamiento y análisis cuantitativo de jàngzhàn del organelo:

• Revelar el transporte dinámico de proteínas entre diferentes organelos celulares.

• Identificar la expresión anormal de proteínas locales relacionadas con la enfermedad.

• Reconstruir la estructura de la red de proteínas bajo la dimensión espacio - temporal.

En esta dirección de investigación, la aplicación conjunta de plataformas de espectrometría de masas de alta resolución y estrategias de etiquetado cuantitativo es particularmente crítica.

II. flujo de trabajo central de la histología subcelular dànbáizhì

1. preparación de muestras y separación de componentes subcelulares

La separación subcelular de alta calidad es la base de todo el proceso. Los principales métodos actuales incluyen:

• Centrifugación diferencial: adecuada para la separación aproximada de la mayoría de los organelos (como mitocondrias, núcleos, vesículas, etc.).

• Centrifugación de gradiente de densidad (como sucrose o gradiente percoll): para una mayor purificación del organelo objetivo.

• Separación de inmunoafinidad: enriquecimiento de organelos específicos a través de anticuerpos, adecuado para estructuras celulares difíciles de separar por centrifugación.

• Método de mapeo de localización subcelular dànbáizhì: combinar silac y otras tecnologías para mejorar la fuerza de análisis espacial.

2. extracción de proteínas y enzima

Los tipos y abundancias de proteínas en diferentes organelos varían significativamente, por lo que es necesario optimizar el sistema de amortiguadores al extraer proteínas, como:

• Para las muestras enriquecidas con módànbái, se recomienda el uso de descontaminantes de alta sal + no iónicos.

• Los componentes nucleares que contienen ácidos nucleicos deben agregar Nucleasas para reducir la viscosidad de la muestra.

La enzima suele utilizar yydànbáiméi (trypsin), combinada con Coenzimas como Lys - C si es necesario, para mejorar la eficiencia de corte de proteínas complejas.

III. explicación detallada de la estrategia cuantitativa: las ventajas de silac en la histología subcelular dànbáizhì

¿1. ¿ qué es silac?

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture） Es una estrategia de etiquetado metabólico que logra una cuantificación relativa de los niveles de dànbáizhì mediante la introducción de aminoácidos que contienen isótopos de diazo durante el cultivo celular. Sus ventajas incluyen:

• No se necesitan modificaciones químicas para evitar la introducción de cambios no fisiológicos.

• Adecuado para la investigación de transbordo dinámico.

• Es naturalmente compatible con la espectrometría de masas y tiene una alta precisión cuantitativa.

En la histología subcelular dànbáizhì, silac es especialmente adecuado para:

• Construcción de mapas de localización de proteínas: diferentes grupos de marcadores silac simulan diferentes organelos celulares y extrapolan la localización a través de la intensidad de la etiqueta y el patrón de distribución.

• Estudio de transporte dinámico: cambios en la intensidad de la etiqueta silac antes y después del tratamiento, revelando la tendencia de migración de proteínas.

• Comparación taxonómica bajo condiciones de selección de alto rendimiento.

2. silac vs otras tecnologías cuantitativas (tmt, Label - free)

IV. análisis de espectrometría de masas e interpretación de datos

1. selección de instrumentos: alta resolución vs alto rendimiento

La histología subcelular de dànbáizhì suele recomendar el uso de espectrómetros de masas de alta resolución (como orbitrap exploris, Series timstof) para mejorar la capacidad de detección de proteínas de baja abundancia y etiquetas isotópicas.

2. proceso de procesamiento de datos

El proceso de análisis típico incluye:

• Preprocesamiento de datos brutos (raw a mzml).

• Identificación y cuantificación de marcadores isotópicos (maxquantum, Proteome discoverer, etc.).

• Asistencia de software de predicción de localización subcelular (como metamass, subcons, etc.).

• Análisis de enriquecimiento y anotaciones funcionales (go, kegg, reacomo).

En los proyectos reales, el control de calidad de los datos es particularmente crítico. Por ejemplo:

• Si la cobertura proteica es equilibrada.

• Si la resolución del pico isotópico es suficiente.

• Si hay interferencia de efecto de lote.

La histología subcelular de dànbáizhì es un puente importante entre la expresión de proteínas de conexión y la función celular. Con la mejora de la sensibilidad de la espectrometría de masas y la diversificación de las técnicas cuantitativas, la histología jàngquè a nivel subcelular se ha convertido en un medio para comprender los fenómenos vitales complejos bùkòhuò. En el futuro, nuevas direcciones como la histología espacial, la predicción de localización asistida por Ia y la histología subcelular unicelular ampliarán aún más los límites de la investigación. Baitaipaike Biotechnology continuará optimizando el proceso de servicio de ventanilla única desde el procesamiento de muestras - Análisis de espectrometría de masas - interpretación de shengxin para ayudar a los investigadores científicos a explorar los misterios de la vida a mayor resolución.

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Proyecto característico de biotecnología de baitaipaike

I. secuenciación de proteínas

La biotecnología de baitepec utiliza el recién lanzado espectrómetro de masas obitrap Fusion Lumos de la compañía Thermo y el sistema de secuenciación de degradación Edelman de la compañía Shimadzu para analizar la secuencia de dànbáizhì, proporcionando servicios de análisis de secuenciación de proteínas basados es en espectrometría de masas, incluyendo análisis de la composición de aminoácidos de dànbáizhì, análisis de secuencia completa de nduàncès, cduàncès y servicio de análisis de secuencia final de dànbáizhìn basado en la degradación de edelman. Para las secuencias teóricas desconocidas de dànbáizhì, se ofrece un servicio de secuenciación de dànbáizhì basado en el método de secuenciación de novo para analizar las secuencias de proteínas.

※ ventajas de servicio:

1. adoptar el instrumento de espectrometría de masas avanzado actual en el mundo, obitrap Fusion lumos;

2. se puede lograr una cobertura del 100% de la secuencia de proteínas Diana determinada;

3. se pueden determinar hasta 70 secuencias de aminoácidos en el extremo n de la proteína;

4. se pueden determinar diversas formas de muestras: soluciones proteicas, bandas proteicas pvdf;

5. baja cantidad de muestra: la muestra de proteína solo necesita 5 - 10ug para completar la prueba;

6. la secuenciación no se ve afectada por modificaciones del extremo n, como el cierre del extremo n, la Pec y la glicosilación.

II. Grupo dànbáizhì

La biotecnología de baitepec utiliza la Plataforma de espectrometría de masas orbitrap Fusion Lumos de Thermo Fisher combinada con Nano - LC para proporcionar una variedad de servicios de análisis de histología dànbáizhì cuantitativos, histología dànbáizhì dirigida, histología polipéptida, proteómica modificada posttraduccional y así sucesivamente. Además, baitaipaike Biotechnology ha lanzado recientemente un servicio de histología 4dànbáizhì basado en timstof pro para ayudar en la investigación de la proteómica de muestras trazas, la medicina de grupos de muestras grandes y la histología modificada de alto rendimiento.

※ ventajas de servicio:

1. Análisis cuantitativo de proteínas de alto rendimiento: Análisis experimental a gran escala en grupos de control múltiple, se encontraron nuevos biomarcadores;

2. una variedad de métodos de marcado dànbáizhì in vivo e in vitro, adecuados para analizar tejidos, células, sangre y otras muestras;

3. la sensibilidad del análisis de espectrometría de masas es alta y la repetición de los resultados experimentales es alta;

4. se pueden detectar proteínas de baja abundancia con un amplio rango lineal;

5. análisis bioinformático de zhuānyè, el análisis es más sistemático y preciso.

3. análisis de la tecnología de flujo de espectrometría de masas unicelular

La biotecnología de baitepec utiliza el sistema de flujo de espectrometría de masas fluidigm para el análisis de la tecnología de flujo de espectrometría de masas unicelular, marcadores de elementos metálicos (generalmente anticuerpos específicos marcados con elementos metálicos) para etiquetar moléculas en la superficie y el interior de las células, luego separa las células individuales con principios de células de flujo, y luego analiza El espectro de masa atómica de las células individuales con espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente (icp - ms), después de lo cual zuì convierte los datos del espectro de masa atómica en expresiones moleculares de señal en la superficie y el interior de las células.

※ ventajas de servicio:

1. tecnología avanzada para llenar las lagunas tecnológicas

La tecnología de anticuerpos marcados con Metal evita el problema de que los canales de fluorescencia de flujo tradicionales son pequeños y fáciles de interactuar. Se pueden caracterizar varios indicadores simultáneamente a nivel unicelular, y la biotecnología baitaipaike puede detectar 51 proteínas objetivo al mismo tiempo.

2. gran cantidad de análisis y bajo costo

El rnaseq unicelular está limitado por factores como el costo, y el número de análisis agregados por todas las células de la muestra es generalmente de unos 2x10,4, mientras que la espectrometría de masas de flujo (muestra única) puede analizar al menos 10,5 células a la vez, logrando un aumento de magnitud y el costo no es superior al rnaseq unicelular.

3. grandes perspectivas de aplicación

① los resultados de la espectrometría de masas de flujo pueden dar cambios en los subgrupos celulares y tienen grandes perspectivas de investigación en el diagnóstico clínico y la investigación del mecanismo de la enfermedad;

② la combinación de la tecnología de etiquetas metálicas con otras tecnologías tendrá nuevas direcciones de aplicación. Además de las proteínas convencionales, la tecnología de células de flujo de espectrometría de masas también se puede utilizar para modificar las proteínas después de la traducción;

③ se puede detectar la tasa de supervivencia celular, el tamaño celular, la expresión del transcriptor de arnm, la tasa de síntesis de ADN y la actividad de la proteasa.

IV. análisis de la histología de los péptidos inmunológicos y descubrimiento de nuevos antígenos basados en espectrometría de masas de alta precisión

Las soluciones de ventanilla única para el análisis de la histología de péptidos inmunológicos y el descubrimiento de nuevos antígenos basadas en espectrometría de masas de alta precisión de baitaipaike Biotechnology incluyen nuestro programa exclusivo y altamente sensible de enriquecimiento e identificación de péptidos inmunológicos. Podemos ayudarle a lograr la identificación y reconocimiento de más de 10000 polipéptidos de tipo I y más de 10000 polipéptidos de tipo II. A través de nuestra plataforma de análisis de inmunopéptidos de alto rendimiento optimizada para el análisis de inmunopéptidos, se puede realizar un reconocimiento repetible y cuantificación a partir de materiales de muestra pequeños de zuì. El Servicio se puede aplicar a la investigación a gran escala y tiene como objetivo ayudar a los investigadores científicos a encontrar soluciones para el cáncer, las enfermedades inmunológicas y las enfermedades infecciosas, profundizando en objetivos desconocidos.

V. caracterización de los medicamentos biológicos

Basado en la tecnología de espectrometría de masas de alta resolución, baitaipaike, MALDI TOF， Tecnología de separación por cromatografía de alto rendimiento, que ofrece una serie de programas de análisis biofarmacéutico de vánshàn, desde el análisis de la composición de aminoácidos y la estructura primaria de productos biológicos como dànbáizhì, polipéptidos, anticuerpos y vacunas, hasta el análisis de la variabilidad y pureza del producto. El objetivo es proporcionar servicios de análisis de medicamentos biológicos de alta calidad para ayudar a los productores de medicamentos biológicos a mejorar la calidad de los medicamentos biológicos.

Siete plataformas de detección de biotecnología de baitaipaike

Baitaipaike biotechnology - caracterización de productos biológicos, espectrometría de masas biológica multigrupo proveedor de servicios de alta calidad

Beijing baitaipaike Biotechnology co., Ltd. se compromete a proporcionar servicios de zhuānyè, como pruebas de control de calidad y verificación de proyectos para la industria biológica / farmacéutica y de dispositivos médicos. Siguiendo las regulaciones y principios rectores de nmpa, ich, FDA y ema, el laboratorio de la compañía ha establecido un sistema de calidad completo a través de la certificación del sistema de doble calidad CNAS / iso9001, copias de Seguridad de datos fríos y calientes / en diferentes lugares, medición regular / verificación de período de equipos, seguimiento de auditoría de software, soluciones integradas y servicios técnicos para clientes, apoyando el desarrollo de nuevos medicamentos, registro de declaraciones de medicamentos y liberación de producción.

1. la compañía adopta el sistema de control de calidad iso9001, y zhuānyè ofrece servicios de detección y análisis de Cro basados es es en espectrometría de masas;

2. ser reconocido por el Laboratorio Nacional CNAS para proporcionar a los clientes servicios de investigación de calidad de medicamentos que cumplan con las regulaciones farmacéuticas globales;

3. el ámbito de negocio abarca la histología dànbáizhì, la histología polipéptida, la metabolómica, la caracterización biofarmacéutica, el análisis unicelular, el flujo de espectrometría de masas unicelular, el análisis en la nube de shengxin y el análisis integrado de espectrometría de masas biológica multigenómica;

4. siete plataformas de inspección de control de calidad para satisfacer sus necesidades de servicio de ventanilla única;

5. servir a más de 3.000 empresas y la elección de más de 10.000 clientes;

¡6. ¡ comprometido a proporcionarle servicios de análisis de espectrometría de masas biológica de alta calidad!

Estrategia completa del flujo de trabajo de Proteoma subcelular (incluyendo espectrometría de masas ySilac technology) introducción detallada del servicio técnico de detección